Immunohistochemical expression of CD44v9 and 8‐OHdG in ovarian endometrioma and the benign endometriotic lesions adjacent to clear cell carcinoma

I m m u n o h i s t o c h e m i c a l e x p r e s s i o n o f C D 4 4 v 9 a n d 8・O H d G i n o v a r i a n e n d o m e t r i o m a a n d t h e b e n i g n e n d o m e t r i o t i c l e s i o n s a d j a c e n t t o c l e a r c e l l c a r c i n o m a . E m i k o N i i r o 1 , N a o k i K a w a h a r a 1 , Y u k i Y a m a d a 1 , C h i h a r u Y o s h i m o t o 1 , K巴 リ iS h i m a d a 2 , T a m o t s u S u d o 3 a n d H i r o s h i K o b a y a s h i 1 . 1 D e p a r t m e n t o f O b s t e t r i c s a n d G y n e c o l o g y , N a r a M e d i c a l U n i v e r s i t y , N a r a , J a p a n . 2 D e p a r t m e n t o f D i a g n o s t i c P a t h o l o g y , N a r a c i t y h o s p i t a l , N a r a J a p a n . 3 S 巴c t i o n o f T r a n s l a t i o n a l R e s e a r c h , H y o g o C a n c e r C e n t e r , H y o g o , J a p a n . C o r r e s p o n d e n c e : N a o k i K a w a h a r a , M D . , D e p a r t m e n t o f O b s t e t r i c s a n d G y n e c o l o g y , N a r a M e d i c a l U n i v e r s i t y , 8 4 0 S h i j o - c h o , K a s h i h a r a , 6 3 4 ・8 5 2 2 , J a p a n . Email ，旦担 恒当牟旦笠亘盟国二~ T e l , + 8 1 ・7 4 4 ・2 9 幽 8 8 7 7 ; F a x , + 8 1 - 7 4 4 ・2 3 ・6 5 5 7 R u n n i n g t i t l e : C D 4 4 v 9 a n d m a l i g n a n t t r a n s f o r m a t i o n o f b e n i g n O E A b s t r a c t A i m : E x p r e s s i o n o f C D 4 4 v a r i a n t i s o f o r r n s ( C D 4 4 v ) p r o m o t e s t h e s y n t h e s i s o f r e d u c e d g l u t a t h i o n e a n d c o n t r i b u t e s t o r e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s ( R O S ) d e f e n s e t h r o u g h u p - r e g u l a t i o n o f t h e i n t r a c e l l u l a r a n t i o x i d a n t . T h e a i m o f t h e s t u d y w a s t o i n v 巴s t i g a t e t h e e x p r e s s i o n o f C D 4 4 v 9 a n d o x i d a t i v e D N A d a m a g 巴 m a r k e r , 8・ O H d G , i n b e n i g n o v a r i a n e n d o m e t r i o m a ( O E ) a n d O E h a r b o r i n g c l e a r c e l l c a r c i n o m a s ( C C C ) . M e t h o d s : A r 巴t r o s p e c t i v e s t u d y w a s p e r f o r m e d a t t h e D e p a r t m e n t o f G y n e c o l o g y , N a r a M e d i c a l U n i v e r s i t y h o s p i t a l 仕o m J a n u a r y 2 0 0 6 t o D e c e m b e r 2 0 1 2 . P a t i e n t s w i t h h i s t o l o g i c a l l y c o n f i r m e d b e n i g n O E ( n = 2 7 ) a n d O E h a r b o r i n g a r e a s o f C C C ( n = 8 ) w e r e s e l e c t 巴d . T i s s u e s a m p l e s w e r e i m m u n o h i s t o c h e m i c a l l y a n a l y z e d f o r t h e p r e s e n c e o f C D 4 4 v 9 a n d 8・O H d G u s i n g a v i d i n - b i o t i n c o m p l e x m e t h o d . R e s u l t s : C D 4 4 v 9 w a s l o c a t e d o n t h e c e l l m e m b r a n e o f e n d o m e t r i o t i c e p i t h e l i a l c e l l s a n d e x p r e s s e d i n 8 8 . 9 % ( 2 4 / 2 7 ) o f b e n i g n O E t i s s u e s . O n l y 2 5 . 0 % ( 2 /8 ) o f b e n i g n e n d o m e t r i o ti c l e s i o n s a d j a c e n t t o C C C w a s f o u n d t o s t a i n w e a k l y f o r C D 4 4 v 9 . P e r c e n t a g e of C D 44 v 9 p o s i ti v e c e l l s wa s 68 . 5 t 2 0 . 2 % ( m e a n土 S D ) o f b e m g r , O E , 1 6 . 7 ま 1 6 . 5 % ） 。 fC C C e n c l o m e t r i o t i c t i s s u e ｛ ？ 、 00 0 1 ) . C o m p a r e d t o b e n i g n O E , C C C e n d o m e t r i o ti c t i s s u e s h o w e d a s i g n i f i c a n t i n c r e a s e i n t h e p r o p o r t i o n o f 8 - 0 H d G e x p r e s s i o n ( 7 7 . 3 土 2 2 . 5 % v s . 9 4 . 9 士 3 . 0 % , p = 0 . 0 4 9 ) . A s i g n i f i c a n t n e g a t i v e c o r r e l a t i o n w a s o b s e r v e d b e t w e e n C D 4 4 v 9 s t a t u s a n d 8・O H d G n u c l e a r e x p r e s s i o n ( r ＝ ・ 0 . 4 5 8 , p = 0 . 0 0 6 ) . C o n c l u s i o n : A l t e r a t i o n s i n C D 4 4 v 9 a n d 8・O H d G m a y b e a s s o c i a t e d w i t h m a l i g n a n t tr a n s f o r m a t i o n o f b e n i g n O E . K e y w o r d s : E n d o m e t r i o s i s ; C l e a r c e l l c a r c i n o m a o f t h e o v a r y ; C D 4 4 v 9 ; 8・O H d G ;I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y . I n t r o d u c t i o n E n d o m e t r i o s i s i s d e f i n e d a s t h e p r e s e n c e o f e n d o m e t r i a l g l a n d s a n d s仕o m a o u t s i d e t h e u t e r u s , m o s t o f t e n i n t h e p e l v i c p e r i t o n e u m o r o v a r i e s [ 1 ] . T h i s d i s o r d e r i s a n e s t r o g e n - d e p e n d e n t b e n i g n g y n e c o l o g i c a l d i s e a s e o f r e p r o d u c t i v e a g e . E n d o m e t r i o s i s i s l i n k e d t o p e l v i c p a i n a n d i n f e r t i l i t y [ 2 ] . O v a r i a n e n d o m e t r i o m a ( O E ) p r e s e n t s a n i n c r e a s e d r i s k o f e n d o m e t r i o s i s 喧 a s s o c i a t e d o v a r i a n c a n c e r ( E A O C ) , p r e d o m i n a n t l y i n e n d o m e t r i o i d a n d c l e a r c e l l c a r c i n o m a s [ 3 , 4 ) . U n o p p o s e d e x p o s u r e t o e s t r o g e n m a y b e a n i m p o r t a n t s t e p t o w a r d u n d e r s t a n d i n g i t s p o t e n t i a l i m p l i c a t i o n s f o r e n d o m e t r i o i d c a r c i n o m a o f t h e o v a r y [ 4 ] . O v a n a n e n d o m e 位i o m a a l s o p l a y s a r o l e i n t h e d e v e l o p m e n t o f c l e a r c e l l c a r c i n o m a ( C C C ) w i t h ti m e . I n J a p a n , t h e m匂o r i t y （ ～ 8 0 % ) o f E A O C h a d C C C w i t h e a r l y s t a g e t u m o r s [ 5 ] . A p a 也o l o g i c a l e v a l u a t i o n o f s p e c i m e n s o f E A O C d e m o n s t r a t e d t h e t r a n s f o n n a t i o n p r o c e s s 合o m b e n i g n e n d o m e t r i o s i s t h r o u g h a句r p i c a l e n d o m e t r i o s i s t o o v a r i a n c a n c e r i n a s t e p w i s e m a n n e r . T h u s , b e n i g n O E i s r e g a r d e d a s b e i n g p o t e n t i a l l y m a l i g n a n t a n d a s s o c i a t e d w i t h i n c r e a s 巴dr i s k o f o v a r i a n c a n c e r [ 2 , 3 ,5 , 6 ] . T h e p r o g r e s s i v e a c c u m u l a t i o n o f a c q u i r e d e p i g e n e t i c a n d g e n e t i c a l t e r a t i o n s w a s i d e n t i f i e d a l o n g t h e e n d o m e t r i o s i s - c a r c i n o m a s e q u e n c e [ 7 ] . T u m o r o r i g i n a t e s a n d p r o g r e s s e s a t t h e s i t e o f c h r o n i c i n f l a m m a t i o n a n d o x i d a t i v e s t r e s s t h a t c r e a t e p r o c a r c i n o g e n i c a n d p r o a n g i o g e n i c t u m o r m i c r o e n v i r o n m e n t b y i n d u c i n g D N A d a m a g e a n d r e p a i r [ 6 ] . I n r e c e n t y e a r s , e v i d e n c 巴 h a s e m e r g e d t h a t , i n e n d o m e t r i o s i s , h e m o g l o b i n , h e m e a n d i r o n o v e r l o a d r e s u l t i n g f r o m r e p e a t e d e p i s o d e s o f h e m o r r h a g e m a y c r e a t e d i s r u p t i o n o f t h e h o m e o s t a t i c r e d o x c i r c u i t s a n d o x i d a t i v e s t r e s s , w h i c h p r o m o t e s D N A m u t a t i o n s o r i n d u c e s D N A d a m a g e a n d g e n o m e i n s t a b i l i t y , p o s s i b l y t h r o u g h a u t o x i d a t i o n a n d F e n t o n c h e m i s t r y [ 6 , 8 ) . T h e a c c u m u l a t i o n o f D N A d a m a g e a n d ( e p i ) g e n e t i c d e f e c t s ma y e m e r g e b a s e d o n p r o f o u n d c h a n g e s o f m i c r o e n vi r o n m en t . R e d o x ・a c t i v e i r o n c o u l d i n d u c e o x i d a t i v e s t r e s s , r e s u l t i n g i n t h e d e v e l o p m e n t o f C C C o f t h e o v a η ／ [ 9 ] . 8・h y d r o x y - 2 ' - d e o x y g u a n o s i n e ( 8 - 0 H d G ) i s a p o t e n t i a l b i o m a r k e r o f D N A o x i d a t i v e d a m a g e f o r v a r i o u s d i s e a s e s , i n c l u d i n g a t h e r o s c l e r o s i s , d i a b e t e s , s m o k i n g a n d c a n c e r s [ 1 0 ) . 8・O H d G m i g h t h a v e a h i g h p r o b a b i l i t y o f h a n n f u l e f f e c t s i n s o m e c e l l s , b u t i t a l s o a c t s a s a d e f e n s e m e c h a n i s m a g a i n s t o x i d a t i v e s t r e s s i n o t h e r c e l l s . F o r e x a m p l e ， せ i e e x p r e s s i o n o f n u c l e a r ふO H d G w e r 巴 d o w n r e g u l a t e d i n E A O C t u m o r o u s t i s s u e c o m p a r e d w i t h O E a n d E A O C e n d o m e 住i o t i c t i s s u e [ 1 1 ] . H o w e v e r , l i m i t e d i n f o n n a t i o n i s s t i l l a v a i l a b l e a b o u t t h e e x p r e s s i o n o f 8・O H d G p r o t e i n b e t w e e n O E a n d b e n i g n e n d o m e t r i o t i c l e s i o n s a d j a c e n t t o t h e c l e a r c e l l c a r c i n o m a ( C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s ) . C D 4 4 i s t h e m句o r c e l l s u r f a c e r e c e p t o r f o r h y a l u r o n a n a n d b e c o m e s a v a l i d c a n c e r s t e m c e l l m a r k e r . T h i s m o l e c u l e e x e r t s p o t e n t i a l p r o t 巴c t i v e e f f e c t a g a i n s t R O S - m e d i a t e d D N A d a m a g e [ 1 2 ) . E x p r e s s i o n o f C D 4 4 , e s p e c i a l l y v a r i a n t i s o f o n n s ( C D 4 4 v ) , c o n t r i b u t e s t o R O S d e f e n s e t h r o u g h u p r e g u l a t i o n o f t h e s y n t h e s i s o f r e d u c e d g l u t a 白1 0 n e ( G S H ) , t h e p r i m a r y i n t r a c e l l u l a r a n t i o x i d a n t [ 1 2 ) . C D 4 4 v d i r e c t l y bi n d s t o a n d s t a b i l i z e s x C T , a s u b u n i t o f a g l u t a m a t e 幽 c y s t i n e t r a n s p o r t e r , t h a t r e s u l t s i n a c c u m u l a t i o n o f a n t i o x i d a n t s a n d p r o t e c t i o n a g a i n s t o x i d a t i v e s t r e s s - r e l a t e d p a t h o l o g i e s [ 1 3 ) . A b e r r a n t a l t e r n a t i v e s p l i c i n g , C D 4 4 v , i s V巴r y c o m m o n i n c a n c e r a n d a s s o c i a t e d w i t h m a l i g n a n t t r a n s f o n n a t i o n , s u r v i v a l i n t h e R O S - g e n e r a t e d w o r s e e n v i r o n m e n t , a g g r e s s i v e n e s s a n d m e t a s t a s i s [ 1 3 , 1 4 ] . A m o n g s p l i c e v a r i a n t i s o f o r m s , C D 4 4 v 9 e x h i b i t e d o v a r i a n c a n c e r 叩 e c i f i c e x p r e s s i o n p a t t e r n s , b u t n o t n o r m a l o v a r i a n t i s s u e s [ 1 5 ] . T h e s e v a r i a n t f o r m s a r e a l s o i n v o l v e d i n t h e d e v e l o p m e n t o f e n d o m e t r i o t i c l e s i o n [ 1 6 ] . M e c h a n i s m s i n v o l v e d i n o x i d a t i v e s t r e s s t o g e t h e r w i t h C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n i n C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s h a v e n o t b巴e n i n v e s t i g a t e d s o f a r . H e r e w e f o c u s e d o n t h e e x p r e s s i o n o f t h e a n t i o x i d a n t m a r k e r , C D 4 4 v 9 , a n d t h e i n f l u e n c e o f o x i d a t i v e D N A d a m a g e m a r k e r , 8 - 0 H d G , l巴v e l s i n O E a n d t h e b e n i g n e n d o m e t r i o t i c l e s i o n s a d j a c e n t t o C C C . M e t h o d s T i s s u e s a m p l e s T h e s a m p l e s c o n s i s t e d o f s u r g i c a l l y r e s e c t e d t i s s u e s f r o m h o s p i t a l i z e d p a t i e n t s . N o p a t i e n t s u n d e r w e n t h o r m o n a l t h e r a p y o r c h e m o t h e r a p y f o r s i x m o n t h s p r i o r t o t h e s u r g e r y . A t o t a l o f 3 5 f o r m a l i n - f i x e d , p a r a f i 自 任 e m b e d d e d t i s s u e s p e c i m e n s , i n c l u d i n g 2 7 c a s e s o f b e n i g n O E a n d 8 c a s e s o f e n d o m e t r i o s i s - a s s o c i a t e d C C C , w e r e r e t r o s p e c t i v e l y c o l l e c t e d 企o m D巴p a r t m e n t o f G y n e c o l o g y a t N a r a M e d i c a l U n i v e r s i t y h o s p i t a l , J a p a n , b e t w 巴e n J a n u a r y 2 0 0 6 a n d D e c e m b e r 2 0 1 2 . E n d o m e t r i o t i c t i s s u e c o m p a r t m e n t w a s t a r g e t e d a s r e l e v a n t r e g i o n s o f i n t e r e s t f o r i m m u n o h i s t o c h e m i c a l a n a l y s i s i n r e l a t i o n t o th e e n d o m e t r i o t i c e p i t h e l i a l c e l l s o f b e n i g n O E a n d e n d o m e t r i o t i c l e s i o n s a d j a c e n t t o C C C t u m o r o u s t i s s u e ( C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s ) . C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s w e r e s e l e c t e d f r o m t h e r e s e c t e d o v a r y o f p a t i e n t s w i t h C C C , w h i c h i n c l u d e s e n d o m e t r i o s i s a p p e a r i n g e p i t h e l i a l c e l l s a d j a c e n t t o t h e p r i m a r y t u m o r s i t e . E n d o m e t r i o s i s w a s p r e s e n t a d j a c e n t t o 出e C C C . T h e d a t a o f p a t i e n t d e m o g r a p h i c f e a t u r e s a n d c l i n i c o p a t h o l o g i c c h a r a c t e r i s t i c s w e r e c o l l e c t e d f r o m a d a t a b a s e c o n t a i n i n g c o m p r e h e n s i v e m e d i c a l r e c o r d s a n d p a t h o l o g y r e p o r t s . T h e p r o t o c o l s w e r 巴 a p p r o v e d b y T h e E t h i c s C o m m i t t e e o f N a r a M e d i c a l U n i v e r s i t y ( r e f e r e n c e n u m b e r : 2 0 1 2 ・5 4 1 ) . W r i t t e n i n f o r m e d c o n s e n t w a s o b t a i n e d 企o m a l l p a t i e n t s . I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y T h r e e p a r a 茄 ns e c t i o n s o f s e r i a l 4 μ m t h i c k n e s s w e r e t a k e n 合o m e a c h o r i g i n a l b l o c k , o n e s e c t i o n w a s s t a i n e d w i t h h e m a t o x y l i n a n d e o s i n f o r d i a g n o s t i c c o n f o m a t i o n a n d t h e o t h e r t w o s e c t i o n s w e r e i m m u n o s t a i n e d f o r C D 4 4 v 9 a n d 8 - 0 H d G b y i m m u n o e n z y m e p o l ym e r m e t h o d s a n d co n ve n t i o n a l m e t h o d s , r e s p e c t i v e l y , u s i n g a n a v i d i n b i o t i n c o m p l e x i m m u n o p e r o x i d a s e t巴c h n i q u e .S l i d e s w e r e d e p a r a f f i n i z e d a n d r e h y d r a t e d , i n c u b a t e i n 3 % H 2 0 2 i n m e t h a n o l t o b l o c k e n d o g e n o u s p e r o x i d a s e . A n t i g e n r e t r i e v a l w a s p e r f o r m e d b y a u t o c l a v i n g a t 1 2 0 ° C f o r 1 0 m i n i n 0 . 0 l M s o d i u m c i t r a t e b u f f e r ( p H 6 . 0 ) . T h e y w e r e b l o c k e d w i t h s e r u m - f r e e p r o t e i n b l o c k s o l u t i o n ( D a k o #X 0 9 0 9 ) f o r t e n m i n u t e s a n d t h e n p r o b e d w i t h p r i m a r y a n t i b o d y C D 4 4 v 9 ( g i ve n b y p r o f e s s o r D r . S a y a H b e l o n g i n g t o D i v i s i o n o f G e n e R e g u l a ti o n , I n s t i t u t e f o r A d v a n c e d M e d i c a l R e s e a r c h , S c h o o l o f M e d i c i n e , K e i o U n i v e r s i t y , T o k y o , J a p a n ) a t a d i l u t i o n o f 1 : 1 2 5 0 0 f o r o n e h o u r , f o l l o w e d b y 出eE n V i s i o n + K i t s ( D A K O # K 4 0 0 6 1 1 ・2 ) f o r 3 0 m i n u t e s , a n d t h e D A B c h r o m o g e n ( D a k o , # K 3 4 6 71 1 ・2 ) f o r t e n m i n u t e s . F u r t h e r m o r e , o t h e r s l i d e s w e r e p r o b e d w i t h p r i m 紅 y a n t i b o d y 8・O H d G ( a b e a m , a b 4 8 5 0 8 ) a t a d i l u t i o n o f 1 : 2 0 0 f o r o n e h o u r , f o l l o w e d b y t h e b i o t i n y l a t e d r a b b i t a n t i - m o u s e I g G ( N i c h i r e i C o r p o r a t i o n # 4 2 4 0 2 1 ・ （ 2 ) ) f o r 1 0 m i n u t e s , t h e n b y t h e p e r o x i d a s e - l a b e l e d s t r e p t a v i d i n ( N i c h i r e i C o r p o r a t i o n # 4 2 4 0 2 1 ・ （ 3 ) ) f o r 7 m i n u t e s , a n d t h e D A B c h r o m o g e n ( N i c h i r e i C o r p o r a t i o n # 4 1 5 1 7 1 ) f o r t e n m i n u t e s . T h e p r i m a r y a n t i b o d i e s w e r e r e p l a c e d w i t h P B S f o r n e g a t i v e c o n t r o l e x p e r i m e n t s . T h e s l i d e s w e r e c o u n t e r s t a i n e d w i t h h e m a t o x y l i n , a n d m o u n t e d u n d e r c o v e r s l i p s w i t h p e r m o u n t . P r o t e i n e x p r e s s i o n w a s e v a l u a t i o n b y 2 i n d e p e n d e n t o b s e r v e r s (K S a n d C Y ) . F i v e h i g h p o w d e r f i 巴I d s w e r e c h o s e n f o r e a c h s a m p l e a n d 1 0 0 0 e p i t h e l i a l c e l l s w e r e e v a l u a t e d . T o d e t e r m i n e t h e e x p r e s s i o n o f t h e p r o t e i n s i n a s e c t i o n , t h e s p e c i m e n s w e r e s c o r e d a c c o r d i n g t o t h e s t a i n i n g i n t e n s i ザ a n d t h e p e r c e n t a g e o f p o s i t i v e c e l l s u s i n g a s e m i - q u a n t i t a t i v e s c o r i n g a p p r o a c h . S i n c e m o s t o f t h e s t a i n i n g i n t e n s i t y w e r e m o d e r a t e b r o w n p a r t i c l e s , t h e i n t e n s i t y o f s t a i n i n g w a s d i v i d e d i n t o n o s t a i n i n g ( a s c o r e o f 0 ) a n d s t a i n i n g ( a s c o r e o f 1 ) , r e s p e c t i v e l y . I n a d d i t i o n , t h e p e r c e n t a g e o f p o s i t i v e c e l l s i n e a c h s a m p l e w a s d巳f i n e d a s t h e r a t i o o f p o s i t i v e l y s t a i n e d e n d o m e t r i o t i c e p i t h e l i a l c e l l s t o a l l e n d o m e t r i o ti c e p i t h e l i a l c e l l s . T h e p e r c e n t a g e o f p o s i t i v e c e l l s w a s s c o r e d a t f o u r l e v e l s : 0 f o r く 5 % , 1 f o r 5 - 3 0 % , 2 f o r 3 1 - 6 0 % , a n d 3 f o r と6 1 % [ 1 7 ] . T h e r e s u l t s w e r e c a l c u l a t e d i n a l l t h e p a t i e n t s a n d w e r e e x p r e s s e d a s t h e m e a n 土 s t a n d a r d d e vi a t i o n ( S D ) . T h e s e t w o v a l u e s ( t h e s t a i n i n g i n t e n s i t y a n d p e r c e n t a g e o f p o s i t i v e c e l l s ) w e r e c o m b i n e d t o d巴c i d e t h e e x p r e s s i o n o f p r o t e i n s i n e a c h g r o u p ( t h e s c o r e < 2 r e p r 巴s e n t s n e g a t i v e a n d 三2r e p r e s e n t s p o s i t i v e ) . S t a t i s t i c a l a n a l y s i s N u m e r i c a l v a r i a b l e s , i n c l u d i n g a g e , w e r e p r e s e n t e d a s t h e m e a n 土 S D . V a r i a b l 巴St h a t d i d n o t p r e s e n t n o r m a l d i s t r i b u t i o n w e r e e x p r 巴s s e d b y m e d i a n , m i n i m u m a n d m a x i m u m v a l u e s . D i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e g r o u p s o f p a t i e n t s w e r e 巴s t i m a t e d b y M a n n - W h i t n e y U t e s t . C a t e g o r i c a l d a t a w e r e a n a l y z e d b y t h e C h トs q u a r e t巴s t o r t h e F i s h e r ’s 2 ・t a i l e d t e s t . T h e p e r c e n t a g e o f C D 4 4 v 9 a n d ふO H d G p o s i t i v e c e l l s p r e s e n t e d n o r m a l d i s t r i b u t i o n , a n d c o r r e l a t i o n b e t w e e n C D 4 4 v 9 a n d 8・O H d G w a s e v a l u a t e d b y P e a r s o n c o r r e l a t io n c o 巴 妊 i c i e n t . A n a l y s e s w e r e p e r f o r m e d b y S P S S v e r s i o n 2 1 . 0 ( I B M S P S S , A r m o n k , N Y , U S A ) . T w o - s i d e d Pく0 . 0 5 w a s c o n s i d e r e d t o i n d i c a t e a s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e . R e s u l t s S t u d y p o p u l a t i o n T h e s t u d y p o p u l a t i o n c o n s i s t e d o f 2 7 p a t i e n t s wi t h b e n i g n O E a n d 8 p a t i e n t s w i t h C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s . T h e c l i n i c o p a t h o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e t w o g r o u p s o f p a t i e n t s a r e s h o w n i n T a b l e 1 . T h e p a t i e n t a g 巴 （ p= 0 . 0 0 1 ) , p r e m e n o p 加 s a l s t a 旬 s( p = 0 . 0 1 1 ） 加 d a m a x i m u m d i a m e t e r o f t h e c y s t ( p = 0 . 0 1 7 ) d i f f e r e d s i g n i f i c a n t l y b e t w e e n p a t i e n t s w i t h E C a n d C C C . P a r i t y a n d s e r u m C A 1 2 5 l e v e l s d i d n o t d i f f e r b e t w e e n t h e t w o g r o u p s . C D 4 4 v 9 a n d 8・O H d G p r o t e i n e x p r e s s i o n I m m u n o h i s t o c h e m i c a l a n a l y s i s o f C D 4 4 v 9 a n d 8・O H d G e x p r e s s i o n w a s s h o w n i n F i g u r e l . C D 4 4 v 9 w a s e x p r e s s e d o n t h e c e l l m e m b r a n e i n e n d o m e t r i o t i c e p i t h e l i a l c e l l s . E n d o m e t r i o t i c s t r o m a l c e l l s w e r e n e g a t i v e f o r C D 4 4 v 9 s t a i n i n g . 8 - 0 H d G w a s r e s t r i c t e d t o t h e n u c l e u s . 8- 0 H d G w a s i d e n t i f i e d i n e n d o m e t r i o t i c e p i t h e l i u m a n d s t r o m a , a n d i t s e x p r e s s i o n w a s g r e a t e r i n e p i t h e l i a l c e l l s t h a n i n s t r o m a l c e l l s . T h 巴 s t a i n i n g w a s p a r t i a l l y p o s i t i v e i n e n d o m e t r i o t i c s t r o m a l c e l l s . T h e r e f o r e , o n l y c e l l m e m b r a n e a n d n u c l e a r s t a i n i n g i n e n d o m e t r i o t i c e p i t h e l i a l c e l l s w e r e e v a l u a t e d . T h e r e s u l t s o f C D 4 4 v 9 a n d 8 - 0 H d G e x p r e s s i o n i n t w o g r o u p s w e r e s u m m a r i z e d i n T a b l e 2 . O f t h e 2 7 O E s p e c i m e n s , 2 4 h a d C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n , w i t h a p o s i t i v e r a t e o f 8 8 . 9 % ( 2 4 / 2 7 ) , w h i l e t h e p o s i t i v e r a t e o f C D 4 4 v 9 w a s 2 5 .0 % ( 2 /8 ) i n C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s p e c i m e n s . C e l l m e m b r a n e C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n w a s m a r k e d l y d o w n r e g u l a t e d i n C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s . T h e m e a n （ 土 S D ) p e r c e n t a g e o f C D 4 4 v 9 p o s i t i v e c e l l s i n C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t i n b e n i g n E C ( 6 8 . 5 士 2 0 . 2 % v e r s u s 1 6 . 7 ± 1 6 . 5 % , pく 0 . 0 0 1 ) . 8・O H d G i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y w a s a l s o a v a i l a b l e i n 3 5 c a s e s . N u c l e a r 8・O H d G p o s i t i v e s t a i n i n g w a s p r 巴s e n t i n 2 6 E C p a t i e n t s ( 2 6 /2 7 , 9 6 . 3 % ) a n d 1 0 0 % ( 8 / 8 ) o f C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s ( P = 0 . 7 7 1 ) , w h i c h w a s u s u a l l y m o d e r a t e s t a i n i n g . H o w e v e r , t h e p e r c e n t a g e o f t h e 8・O H d G - p o s i t i v e e n d o m e 仕i o t i c e p i t h e l i a l c e l l s w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r i n t h e C C C g r o u p t h a n i n 出eO E g r o u p ( 9 4 . 9 土 3. 0 %v e r s u s 7 7 . 3 土 2 2 . 5 % , p = 0 . 0 4 9 ) . W e a n a ly z e d t h e c o r r e l a t i o n o f t h e p e r c e n t a g e ( % ) o f t h e p o s i t i v e C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n w i t h t h a t o f t h e p o s i t i v e 8 - 0 H d G e x p r e s s i o n i n t h e t w o g r o u p s . A s i g n i f i c a n t n e g a t i v e c o r r 巴l a t i o n b e t w e e n C D 4 4 v 9 a n d 8・ O H d G e x p r e s s i o n w a s i d e n t i f i e d , w i t h a c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t o f - 0 . 4 5 8 ( P = 0 . 0 0 6 ) ( F i g u r e 2 ) D i s c u s s i o n W e p e r f o r m e d i m m u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n i n g o f C D 4 4 v 9 a n d 8 - 0 H d G i n p a r a f f i n - e m b e d d 巴dt i s s u e s o f O E a n d t h e b e n i g n e n d o m e 仕i o t i c l e s i o n s a d j a c e n t t o C C C . A h i g h l e v e l o f 8 - 0 H d G p r o t e i n e x p r e s s i o n w a s f o u n d i n e n d o m e 位i o t i c e p i t h e l i a l c e l l s o f t w o g r o u p s , w h i l e t h e C D 4 4 v 9 i m m u n o r e a c t i v i t y w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r i n C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s c o m p a r e d t o b e n i g n O E . O u r d a t a s u g g e s t t h a t t h e d o w n r e g u l a t i o n o f C D 4 4 v 9 a n d t h e u p r e 忽i l a t i o n o f 8 - 0 H d G i n O E le s i o n s m a y p r o v i d e a n e x c e s s o x i d a t i v e s t r e s s a n d f u t u r e r i s k o f m a l i g n a n t s t e p . O x i d a t i v e s t r e s s i s c o n s i d e r e d t o b e a n i m p o r t a n t t r i g g e r f o r e n d o m e t r i o s i s c a r c i n o g e n e s i s [ 1 8 ) . R e p e a t e d e p i s o d e s o f h e m o r r h a g e o c c u r i n e n d o m e t r i o s i s a t t h e o n s e t o f m e n s t r u a t i o n . E x t r a c e l l u l a r h e m o g l o b i n , h e m e , a n d i r o n s p e c i e s i n e n d o m e t r i o t i c c y s t c a u s e D N A d a m a g e a n d m u t a t i o n s , w h i c h c r e a t e i n c r e a s e d c e l l u l a r s u s c e p t i b i l i t y t o o x i d a n t ・m e d i a t e d c e l l k i l l i n g o r c a r c i n o g e n e s i s [ 6 ,8 , 1 8 , 1 9 ) . N o t o n l y e n d o m e t r i o s i s b u t a l s o g e n e t i c h e m o c h r o m a t o s i s , c h r o n i c v i r a l h e p a t i t i s a n d a s b e s t o s i s i n d u c e i r o n o v e r l o a d a n d h a v e b e e n a s s o c i a t e d w i t h i r o n - i n d u c e d c a r c i n o g e n e s i s [ 2 0 ] . 8 - 0 H d G i s a n e s t a b l i s h e d m a r k e r o f d e g r e e o f D N A o x i d a t i v e d a m a g e . C y s t f l u i d h e m o g l o b i n a n d i r o n o v e r l o a d m a y b e a s s o c i a t e d w i t h t h e u p r e g u l a t i o n o f 8・O H d G i n O E l e s i o n s [ 8 , 1 9 ] . O u r d a t a a r e c o n s i s t e n t w i t h p r e v i o u s s t u d i e s r e p o r t i n g t h a t o x i d a t i v e s t r e s s i s u p r e g u l a t e d i n e n d o m e t r i o s i s - a s s o c i a t e d C C C c a r c i n o g e n e s i s [ 1 8 ] . T h e c o ・r e g u l a t i o n a n d f i n e - t u n i n g o f o x i d a t i v e s t r e s s a n d a n t i o x i d a n t s m a y b e m o r e p r e d i c t i v e o f e n d o m e t r i o s i s - c a r c i n o m a s e q u e n c e p r o g r e s s i o n [ 1 9 ] . C D 4 4 v 9 m a y p l a y a c r i t i c a l r o l e a s a s u p p r e s s o r o f C C C c a r c i n o g e n e s i s i n b e n i g n O E . A n t i o x i d a n t s仕a t e g y m a y b e v i e w e d a s a n a p p r o a c h t o p r e v e n t m a l i g n a n t t r a n s f o r m a t i o n o f e n d o m e t r i o s i s . T h i s s t u d y h a s l i m i t a t i o n s . F i r s t l y , t h e s c o p e o f t h e p r e s e n t s t u d y w a s l i m i t e d t o 巴n d o m 巴t r i o t i c e p i t h e l i a l c e l l s i n b e n i g n O E a n d b e n i g n e n d o m e t r i o t i c l e s i o n s n e x t t o c l e a r c巴1 1 c a r c i n o m a . I n o r d e r t o i n v e s ti g a t e t h e r o l e o f C D 4 4v 9 a n d 8 ・O H d G i n C C C c a r c i no g e n e s i s , w e f o c u s e d ou r at t e n t i o n t o t h e D N A o x i d a t i v e d a m a g e a n d a n t i - o x i d a n t p r o p e r t i e s i n C C C en d o m e t n o t i c t i s s u e s . A c t u a l l y , w e a t t e m p t e d t o c o m p a r e t h e e x pr e s s m n o f t h e s e p r o t ei n s a m o n g O E gr o u p s ラ C C C e n d o m e t T i o t i c t i s s u e s a n d C C C t u m o r t i ss u e s . A n d m o r e p r o m i n e n t d i f f e r e n c e w a s o b s e r v e d b e t w e e n O E a n d C C C en d o m 巴tr i o t i ct i s s u e s t h a n O E a n d C C C h 1 m o r t i s s u e s （ ’ T a b l e 3 ) . M o r e o v e r , o u r d a t a sh o w e d t h a t t h e e x p r e s s i o n o f 8・O H d G i n c r e a s e d i n E A O C 巴n d o m e t ri o t i c t i s s u 巴 t h a n O E g r o u p s . Th i s r e s u l t i s n o t c o n 仕a r y t o t h e p r e v i o u s r e p o r t t h a t c y s t f l u i d he m o g l o b i n a n d i r o n o v e r l o a d a r e m o r e s e v e r e i n O E t h a n E A O C [ 8 , 1 9 ] . S e c o n d l y , t h e n u m b e r o f s a m p l e s w a s r e l a t i v e l y s m a l l . I n t h e 8 c a s e s w i t h C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s , a d i r e c t c o n t i n u o u s t r a n s i t i o n w a s n o t e d 企o m c l e a r l y b e n i g n e n d o m e t r i o s i s t h r o u g h a t y p i c a l e n d o m e t r i o s i s t o C C C . T h 巴l i m i t a t i o n c a n b e a d d r e s s e d i n t h e h旬r e w i t h v a l i d a t i o n i n c o r p o r a t i n g a l a r g 巴rs a m p l e s i z e o f C C C w i t h m o r p h o l o g i c d o c u m e n t a t i o n o f t h e c o n t i n u o u s t r a n s i t i o n . F i n a l l y , w e f o u n d i n s u f f i c i e n t e v i d e n c e t o c o n f i r m w h e t h e r r e s u l t s a r e m o r e o r l e s s a p p l i c a b l e f o r v a r i o u s s u b g r o u p s o f E A O C . T h e s t u d y e n r o l l e d p a t i e n t s w i t h C C C ; t h e r e f o r e , r e s u l t s m a y n o t b e a p p l i c a b l e t o p a t i e n t s w i t h e n d o m e t r i o s i s - a s s o c i a t e d e n d o m e t r i o i d c a r c i n o m a . W e m u s t e x e m p l i f シw h e t h e r t h e C D 4 4 v 9 p r o t e i n e x p r e s s i o n h a s b e e n d o w n r e g u l a t e d , p o t e n t i a l l y d u e t o i t s p r i m a r y r e g u l a t i o n b y e p i g e n e t i c o r g e n e t i c m e c h a n i s m s . N o t w i t h s t a n d i n g t h e s e l i m i t a t i o n s , r e d u c e d e x p r e s s i o n o f C D 4 4 v 9 m a y b e a s s o c i a t e d w i t h m a l i g n a n t t r a n s f o r m a t i o n o f b e n i g n O E . I n c o n c l u s i o n , p r e s e n t o b s e r v a t i o n s d e m o n s t r a t e d t h a t d o w n r e g u l a t i o n o f C D 4 4 v 9 a n d u p r e g u l a t i o n o f 8・ O H d G m a y b e a s s o c i a t e d w i t h t u m o r m i c r o e n v i r o n m e n t o f e n d o m et r i o s i s - a s s o c i a t e d C C C c a r c i n o g e n e s i s . A c k n o w l e d g e m e n t s T h i s w o r k w a s s u p p o r t e d b y J S P S K A K E N H I G r a n t N u m b e r J P 1 6 K 1 1 1 5 0 , T a k e d a S c i 巴n e e F o u n d a t i o n T o h o k u B u r e a u o f E c o n o m y , T r a d e a n d I n d u s t r y a n d K o n i c a M i n o l t a S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y F o u n d a t i o n i n 2 0 1 7 D i s c l o s u r e N o n e d e c l a r e d . R e f e r e n c e s 1 . B u l u n S E . E n d o m e t r i o s i s . N E n g l J M e d 2 0 0 9 ; 3 6 0 ： ・ 2 6 8 - 7 9 . 2 . H i g a s h i u r a Y , K a j i h a r a H , S h i g e t o m i H , K o b a y a s h i H . I d e n t i f i c a t i o n o f m u l t i p l e p a t h w a y s i n v o l v e d i n t h e m a l i g n a n t t r a n s f o r m a t i o n o f e n d o m e t r i o s i s . O n c o l L e t t 2 0 1 2 ; 4 : 3 - 9 . 3 . B r i n t o n L A , S a k o d a L C , S h e r m a n M E , e t a l . R e l a t i o n s h i p o f b e n i g n g y n e c o l o g i c d i s e a s e s t o s u b s e q u e n t r i s k o f o v a r i a n a n d u t e r i n e t u m o r s . C a n c e r E p i d e m i o l B i o m a r k er s P r e v 2 0 0 5 ; 1 4 : 2 9 2 9 ・3 5 . 4 . S o l i m a n N F , H i l l a r d T C . H o r m o n e r e p l a c e m e n t t h e r a p y i n w o m e n w i t h p a s t h i s t o r y o f e n d o m e 出 o s i s . C l i m a c t e r i c 2 0 0 6 ; 9 : 3 2 5 ・3 5 . 5 . K o b a y a s h i H . O v a r i a n c a n c e r i n e n d o m e t r i o s i s : e p i d e m i o l o g y , n a t u r a l h i s t o r y , a n d c l i n i c a l d i a g n o s i s . I n t J C l i n O n c o l 2 0 0 9 ; 1 4 : 3 7 8 - 8 2 . 6 . K o b a y a s h i H . P o t e n t i a l s c e n a r i o s l e a d i n g t o o v a r i a n c a n c e r a r i s i n g f r o m e n d o m e t r i o s i s . R e d o x R e p 2 0 1 6 ; 2 1 : 1 1 9 ・2 6 . 7 . K u r m a n R J , S h i h I e M . M o l e c u l a r p a t h o g e n e s i s a n d e x t r a o v a r i a n o r i g i n o f e p i 也e l i a l o v a r i a n c a n c e ト s h i 食m g t h e p a r a d i g m . H u m P a t h o l 2 0 1 1 ; 4 2 : 9 1 8 ・3 1 . 8 . Y o s h i m o t o C , l w a b u c h i T , S h i g e t o m i H , K o b a y a s h i H . C y s t f l u i d i r o n - r el a t e d c o m p o u n d s a s us e f u l m a r k e r s t o d i s t i n g u i s h m a l i g n a n t t r a n s f o r m a t i o n f r o m b e n i g n e n d o m e t r i o t i c c y s t s . C a n c e r B i o m a r k 2 0 1 5 ; 1 5 : 4 9 3 - 9 . 9 . K o s h i y a m a M , M a t s u m u r a N , K o n i s h i I . Re c e n t c o n c e p t s o f o v a r i a n c a r c i n o g e n e s i s : t y p e I a n d t y p e I I . B i o m e d R巴SI n t 2 0 1 4 ; 2 0 1 4 : 9 3 4 2 6 1 . 1 0 . O c k C Y , K i m E H , C h o i D J , L e e H J , H a h m K B , C h u n g h任I . 8 - H y d r o x y d e o x y g u a n o s i n e : n o t m e r e b i o m a r k e r f o r o x i d a t i v e s t r e s s , b u t r e m e d y f o r o x i d a t i v e s t r e s s - i m p l i c a t e d g a s t r o i n t e s t i n a l d i s e a s e s . W o r l d J G a s t r o e n t e r o l 2 0 1 2 ; 1 8 : 3 0 2 ”8 . 1 1 . S o v a H , K a n g a s J , P u i s t o l a U , S a n t a l a M , L i a k k a A , K a r i h t a l a P . D o w n - r e g u l a t i o n o f 8 - hy d r o x y d e o x y g u a n o s i n e a n d p e r o x i r e d o x i n I I i n t h e p a t h o g e n e s i s o f en d o m e t r i o s i s - a s s o c i a t e d o v a r i a n c a n c e r . A n t i c a n c e r R巴s2 0 1 2 ; 3 2 : 3 0 3 7 - 4 4 . 1 2 . N a g a n o 0 , O k a z a k i S , S a y a H . R e d o x r e g u l a t i o n i n s t e m - l i k e c a n c e r c e l l s b y C D 4 4 v a r i a n t i s o f o r m s . O n c o g e n e 2 0 1 3 ; 3 2 : 5 1 9 1 ・3 1 3 . l s h i m o t o T , N a g a n o 0 , Y a e T , e t al . CD 4 4 v a r i a n t r e g u l a t e s r e d o x s t a t u s i n c a n c e r c e l l s b y s t a b i l i z i n g t h e x C T s u b u n i t o f s y s t e m x c （ ー ） a n d t h e r e b y p r o m o t e s t u m o r g r o w t h . C a n c e r C e l l 2 0 1 1 ; 1 9 : 3 8 7 - 4 0 0 . 1 4 . P a u l i s Y W , H u i j b e r s E J , v a n d e r S c h a 丘D W ， 巴 ta l . C D 4 4 e n h a n c e s t u m o r a g g r e s s i v e n e s s b y p r o m o t i n g t u m o r c e l l p l a s t i c i t y . O n c o t a r g e t 2 0 1 5 ; 6： ・ 1 9 6 3 4 - 4 6 . 1 5 . Y o r i s h i m a T , N a g a i N , O h a m a K . E x p r e s s i o n o f C D 4 4 a l t e r n a t i v e s p l i c i n g v a r i a nt s i n p r i m a 叩 a n d l y m p h n o d e m e t a s t a t i c l e s i o n s o f g y n e c o l o g i c a l c a n c e r . H i r o s h i m a J M e d S c i 19 9 7 ; 4 6 : 2 1 ・9 . 1 6 . G r i 伍 t h J S , L i u Y G , T e k m a l R R , B i n k l e y P A , H o l d e n A E , S c h e n k e n R S . M e n s t r u a l e n d o m e t r i a l c e l l s f r o m w o m e n w i t h e n d o m e t r i o s i s d e m o n s t r a t e i n c r e a s e d a d h e r e n c e t o p e r i t o n e a l c e l l s a n d i n c r e a s e d e x p r e s s i o n o f C D 4 4 s p l i c e v a r i a n t s . F e r t i l S t e r i l 2 0 1 0 ; 9 3 ： ・ 1 7 4 5 ・9 . 1 7 . G o r d o n I O , T r e t i a k o v a M S , N o f f s i n g e r A E , H a r t J , R e u t e r V E , A l - A h m a d i e H A . P r o s t a t e - s p e c i f i c m e m b r a n e a n t i g e n e x p r e s s i o n i n r e g e n e r a t i o n a n d r e p a i r . M o d P a t h o l 2 0 0 8 ; 2 1 : 1 4 2 1 - 7 . 1 8 . Y a m a g u c h i K , M a n d a i M , T o y o k u n i S , e t a l . C o n t e n t s o f e n d o m e t r i o t i c c y s t s , e s p e c i a l l y t h e h i g h c o n c e n t r a t i o n o f f r e e i r o n , a r e a p o s s i b l e c a u s e o f c a r c i n o g e n e s i s i n t h e c y s t s 出r o u g h t h e i r o n - i n d u c e d p e r s i s t e n t o x i d a t i v e s t r e s s . C l i n C a n c e r R e s 2 0 0 8 ; 1 4 ： ・ 3 2 ・4 0 . 1 9 . l w a b u c h i T , Y o s h i m o t o C , S h i g e t o m i H , K o b a y a s h i H . O x i d a t i v e S t r e s s a n d A n t i o x i d a n t D e f e n s e i n E n d o m e t r i o s i s a n d I t s M a l i g n a n t T r a n s f o r m a t i o n . O x i d M e d C e l l L o n g e v 2 0 1 5 ; 2 0 1 5 : 8 4 8 5 9 5 . 2 0 . T o y o k u n i S . M y s t e r i o u s l i n k b e t w e e n i r o n o v e r l o a d a n d C D K N 2 A /2 B . J C l i n B i o c h e m N u t r 2 0 1 1 ; 4 8 : 4 6 - 9 . F i g u r e 1 C D 4 4 v 9 a n d 8・O H d G i m m u n o r e a c t i o n s i n b e n i g n O E a n d C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s . O r i g i n a l m a g n i f i c a t i o n × 1 0 0 a n d × 4 0 0 . A a n d C , b e n i g n O E . B a n d D , C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e . A a n d B , C D 4 4 v 9 i m m u n o s t a i n i n g . C a n d D , 8 ・O H d G i m m u n o s t a i n i n g . C D 4 4 v 9 ; C D 4 4 v a r i a n t 9 , 8 ・O H d G ; 8 - h y d r o x y - 2 ’ － d e o x y g u a n o s i n e , O E ; o v a r i a n e n d o m e t r i o m a , C C C ; c l e a r c e l l c a r c i n o m a . F i g u r e 2 A s i g n i f i c a n t n e g a t i v e c o r r e l a t i o n b e t w e e n C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n a n d 8・O H d G e x p r e s s i o n s ( r = ・0 . 4 5 8 , P = 0 . 0 0 6 ) . y = - 0 . 3 3 l x + 9 9 . 9 9 7 . x , t h e p o s i t i v i t y o f C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n ; y , t h e p o s i t i v i t y o f 8・O H d G e x p r e s s i o n . O p e n c i r c l e r e p r e s e n t s a n i n d i v i d u a l v a l u e o f b e n i g n O E . C l o s e d c i r c l e r e p r 巴s e n t s 叩 i n d i v i d u a l v a l u e o f C C C 巴n d o m e t r i o t i c e p i t h e l i a l c e l l s . C D 4 4 v 9 ; C D 4 4 v a r i a n t 9 , 8 ・O H d G ; 8・h y d r o x y - 2 ' - d e o x y g u a n o s i n e ,O E ; o v a r i a n e n d o m e t r i o m a , C C C ; c l e a r c e l l c a r c i n o m a . 箇 。 。 寸 》 《 ‘ ま 。 。 守 X O O H X u oodx , . . . . . . . , . ~ 0 ' - - " ' 0 0 • • • , . r l • • • 0 0 0 • ' • • • I • • • 0 0 ) , . • l O > ~ ~ Q u 0 t j " • 0 N 0 , , . - . . . . 0 0 0 ' 3 - 0 0 0 I J ) " ' - . _ / M 0 9 P H 0 - 8 T a b l e 1 D e m o g r a p h i c a n d c l i n i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e s t u d y p o p u l a t i o n . B a s e l i n e c h a r a c t e r i s t i c s o f t w o g r o u p s T h e O E g r o u Q T h e C C C g r o u p P - v a l u e N u m b e r 2 7 8 F I G O s t a g e I ( n = 5 ) , I I ( n = l ) , I I I ( n = l ) , I V ( n = l ) A g e a t d i a g n o s i s , m e a n 土 S D 4 0 . 6 土1 0 . 3 5 7 . 0 土1 0 . 1 0 . 0 0 1 m e d i a n ( r a n g e ) 4 2 ( 2 0 -6 8 ) 5 5 . 5 ( 4 7 ・75 ) N u l l i p a r o u s n ( % ) 1 5 ( 5 5 .6 % ) 2 ( 2 5 .0 % ) 0 . 1 1 2 P r e m e n o p a u s e n ( % ) 2 1 ( 7 7 .8 % ) 2 ( 2 5 .0 % ) 0 . 0 1 1 A m a x i m u m d i a m e t e r o f t h e c y s t ( c m ) m e a n 土 S D 6 . 9 土 3 . 9 1 2 . 7 士 5 . 5 0 . 0 1 7 m e d i a n ( r a n g e ) 6 . 3 ( 1 . 2 2 1 . 0 ) 1 3 . 0 ( 4 . 7 - 2 0 . 0 ) C A 1 2 5 ( U /m l ) m e a n 士 S D 1 1 2 . 4 ± 1 6 1 . 4 1 1 3 . 4 土 1 5 6 . 5 0 . 9 8 3 m e d i a n { r a n g e 2 4 0 { 6 -5 7 7 2 3 6 . 0 ( 7 -4 6 5 ) T h e p a t i e n t a g e ( p = 0 . 0 0 1 ) , p r e m e n o p a u s a l s t a t u s ( p = 0 . 0 1 1 ) a n d a m a x i m u m d i a m e t e r o f t h e c y s t 印 ＝ 0 . 0 1 7 ) d i f f e r e d s i g n i f i c a n t l y b e t w e e n p a t i e n t s w i t h E C a n d C C C . F I G O , I n t e r n a t i o n a l F e d e r a t i o n o f G y n e c o l o g y a n d O b s t e t r i c s ; E C , e n d o m e t r i a l c y s t ; C C C , c l e a r c e l l c a r c i n o m a . T a b l e 2 T h e r e s u l t s o f C D 4 4 v 9 a n d 8・O H d G e x p r e s s i o n i n t w o g r o u p s . T h e r e s u l t s o f C D 4 4 v 9 a n d 8・O H d G e x p r e s s i o n T h e O E g r o u p T h e C C C g r o u p P - v a l u e N u m b e r 2 7 8 T h e p e r c e n t a g e o f C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n 6 8 . 5 士 2 0 . 2 % 1 6 . 7 士 1 6 . 5 % く 0 . 0 0 1 C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n P o s i t i v e 2 4 2 0 . 0 0 1 N e g a t i v e 3 6 T h e p e r c e n t a g 巴 o f 8・O H d G e x p r e s s i o n 7 7 . 3 土 2 2 . 5 % 9 4 . 9 土 3 . 0 % 0 . 0 4 9 8・O H d G e x p r e s s i o n P o s i t i v e 2 6 8 0 . 7 7 1 N e g a t i v e 。 C e l l m e m b r a n e C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n w a s m a r k e d l y d o w n r e g u l a t e d i n C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s . T h e m e 姐 （ 土 S D ) p e r c e n t a g e o f C D 4 4 v 9 p o s i t i v e c e l l s i n C C C e n d o m et r i o t i c t i s s u e s w a s s i g n i f i c an t l y l o w e r t h a n t h a t i n b e n i g n E C ( 6 8 . 5 土 2 0 . 2 % v e r s u s 1 6 . 7 土 1 6 .5 % , p < 0 . 0 0 1 ) . C D 4 4 v 9 , C D 4 4 v a r i a n t 9 ; 8 - 0 H d G , 8 - h y d r o x y - 2 ' - d e o x yg u a n o s i n e ; C C C , c l e a r c e l l c a r c i n o m a ; E C , e n d o m e t r i a l c y s t . T a b l e 3 T h e r巴l a t i o n o f C D 4 4 v 9 a n d 8 - 0 H d G e x p r e s s i o n i n t h r e e g r o u p s . T h e r e s u l t s o f C D 4 4 v 9 T h e O E g r o u p T h e C C C p - va l u e a n d 8・O H d G e x p r e s s i o n E n d o m e t r i o t i c t i s s u e s T u m o r t i s s u e s N u m b e r 2 7 8 8 T h e p e r c e n ta g e o f C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n 6 8 . 5 土 2 0 . 2 % 1 6 . 7 土 1 6 . 5 % 5 6 . 9 ± 3 2 . 8 % く0 . 0 0 1 C D 4 4 v 9 e x p r 巴s s i o n P o s it i v e 2 4 2 6 N e g a t i v e 3 6 2 T h e p e r c e n t a g e o f 8・O H d G e x p r e s s i o n 7 7 . 3 土 2 2 .5 % 9 4 . 9 土 3 . 0 % 8 8 . 9 土 1 4 .6 % 0 . 1 0 3 8・O H d G 巴x p r e s s i o n P o s it i v e 2 6 8 8 N e g a t i v e 。 。 R e m a r k a b l e di f f e r e n c e i n C D 4 4 v 9 e x p r e s s i o n w a s o b s e r v e d a m o n g O E g r o u p s , C C C e n d o m e t r i o t i c t i s s u e s a n d C C C 加m o r t i s s u e s . T h e s e d a t a a r e s h o w n i n m e a n （ 土 S D ) . C D 4 4 v 9 , C D 4 4 v a r i a n t 9 ; 8 - 0 H d G , 8・hy d r o x y - 2 ' -d e o x y g u a n o s i n e ; C C C , c l e a r c e l l c a r c i n o m a ; E C , e n d o m e t r i a l c y s t .