{"paper_id":"e25e4e0e-9fa8-4a2d-8452-063f00912f6d","body_text":"I m m u n o h i s t o c h e m i c a l  e x p r e s s i o n  o f  C D 4 4 v 9  a n d  8・O H d G i n  o v a r i a n  e n d o m e t r i o m a  a n d  t h e  b e n i g n  \ne n d o m e t r i o t i c  l e s i o n s  a d j a c e n t  t o  c l e a r  c e l l  c a r c i n o m a .  \nE m i k o  N i i r o 1 ,  N a o k i  K a w a h a r a 1 ,  Y u k i  Y  a m a d a 1 ,  C h i h a r u  Y o s h i m o t o 1 ,  K巴 リ iS h i m a d a 2 ,  T a m o t s u  S u d o 3  a n d  \nH i r o s h i  K o b a y a s h i  1 .  \n1 D e p a r t m e n t  o f  O b s t e t r i c s  a n d  G y n e c o l o g y ,  N a r a  M e d i c a l  U n i v e r s i t y ,  N a r a ,  J a p a n .  \n2 D e p a r t m e n t  o f  D i a g n o s t i c  P a t h o l o g y ,  N a r a  c i t y  h o s p i t a l ,  N a r a  J a p a n .  \n3 S 巴c t i o n o f  T r a n s l a t i o n a l  R e s e a r c h ,  H y o g o  C a n c e r  C e n t e r ,  H y o g o ,  J a p a n .  \nC o r r e s p o n d e n c e :  N a o k i  K a w a h a r a ,  M D . ,  D e p a r t m e n t  o f  O b s t e t r i c s  a n d  G y n e c o l o g y ,  N a r a  M e d i c a l  \nU n i v e r s i t y ,  8 4 0  S h i j o - c h o ,  K a s h i h a r a ,  6 3 4 ・8 5 2 2 , J a p a n .  Email ，旦担 恒当牟旦笠亘盟国二~ \nT e l ,  + 8 1 ・7 4 4 ・2 9 幽 8 8 7 7 ; F a x ,  + 8 1 - 7 4 4 ・2 3 ・6 5 5 7 \nR u n n i n g  t i t l e :  C D 4 4 v 9  a n d  m a l i g n a n t  t r a n s f o r m a t i o n  o f  b e n i g n  O E  \n\nA b s t r a c t  \nA i m :  E x p r e s s i o n  o f  C D 4 4  v a r i a n t  i s o f o r r n s  ( C D 4 4 v )  p r o m o t e s  t h e  s y n t h e s i s  o f  r e d u c e d  g l u t a t h i o n e  a n d  \nc o n t r i b u t e s  t o  r e a c t i v e  o x y g e n  s p e c i e s  ( R O S )  d e f e n s e  t h r o u g h  u p - r e g u l a t i o n  o f  t h e  i n t r a c e l l u l a r  a n t i o x i d a n t .  \nT h e  a i m  o f  t h e  s t u d y  w a s  t o  i n v 巴s t i g a t e t h e  e x p r e s s i o n  o f  C D 4 4 v 9  a n d  o x i d a t i v e  D N A  d a m a g 巴 m a r k e r , 8・\nO H d G ,  i n  b e n i g n  o v a r i a n  e n d o m e t r i o m a  ( O E )  a n d  O E  h a r b o r i n g  c l e a r  c e l l  c a r c i n o m a s  ( C C C ) .  \nM e t h o d s :  A r 巴t r o s p e c t i v e s t u d y  w a s  p e r f o r m e d  a t  t h e  D e p a r t m e n t  o f  G y n e c o l o g y ,  N a r a  M e d i c a l  U n i v e r s i t y  \nh o s p i t a l 仕o m J a n u a r y  2 0 0 6  t o  D e c e m b e r  2 0 1 2 .  P a t i e n t s  w i t h  h i s t o l o g i c a l l y  c o n f i r m e d  b e n i g n  O E  ( n  =  2 7 )  \na n d  O E  h a r b o r i n g  a r e a s  o f  C C C  ( n  =  8 )  w e r e  s e l e c t 巴d . T i s s u e  s a m p l e s  w e r e  i m m u n o h i s t o c h e m i c a l l y  \na n a l y z e d  f o r  t h e  p r e s e n c e  o f  C D 4 4 v 9  a n d  8・O H d G u s i n g  a v i d i n - b i o t i n  c o m p l e x  m e t h o d .  \nR e s u l t s :  C D 4 4 v 9  w a s  l o c a t e d  o n  t h e  c e l l  m e m b r a n e  o f  e n d o m e t r i o t i c  e p i t h e l i a l  c e l l s  a n d  e x p r e s s e d  i n  8 8 . 9 %  \n( 2 4 / 2 7 )  o f  b e n i g n  O E  t i s s u e s .  O n l y  2 5 . 0 %  ( 2 /8 )  o f  b e n i g n  e n d o m e t r i o ti c  l e s i o n s  a d j a c e n t  t o  C C C  w a s  f o u n d  \nt o  s t a i n  w e a k l y  f o r  C D 4 4 v 9 .  P e r c e n t a g e  of C D 44 v 9  p o s i ti v e  c e l l s  wa s  68 . 5  t  2 0 . 2 %  ( m e a n土 S D ) o f b e m g r ,  \nO E ,  1 6 . 7 ま 1 6 . 5 % ） 。 fC C C  e n c l o m e t r i o t i c  t i s s u e  ｛ ？ 、 00 0 1 ) .  C o m p a r e d  t o  b e n i g n  O E ,  C C C  e n d o m e t r i o ti c  \nt i s s u e  s h o w e d  a  s i g n i f i c a n t  i n c r e a s e  i n  t h e  p r o p o r t i o n  o f  8 - 0 H d G  e x p r e s s i o n  ( 7 7  . 3 土 2 2 . 5 % v s .  9 4 . 9 士 3 . 0 % , \np  =  0 . 0 4 9 ) .  A  s i g n i f i c a n t  n e g a t i v e  c o r r e l a t i o n  w a s  o b s e r v e d  b e t w e e n  C D 4 4 v 9  s t a t u s  a n d  8・O H d G n u c l e a r  \ne x p r e s s i o n  ( r  ＝ ・ 0 . 4 5 8 , p  =  0 . 0 0 6 ) .  \nC o n c l u s i o n :  A l t e r a t i o n s  i n  C D 4 4 v 9  a n d  8・O H d G m a y  b e  a s s o c i a t e d  w i t h  m a l i g n a n t  tr a n s f o r m a t i o n  o f  \nb e n i g n  O E .  \nK e y w o r d s :  E n d o m e t r i o s i s ;  C l e a r  c e l l  c a r c i n o m a  o f  t h e  o v a r y ;  C D 4 4 v 9 ;  8・O H d G ;I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y .  \n\nI n t r o d u c t i o n  \nE n d o m e t r i o s i s  i s  d e f i n e d  a s  t h e  p r e s e n c e  o f  e n d o m e t r i a l  g l a n d s  a n d  s仕o m a o u t s i d e  t h e  u t e r u s ,  m o s t  o f t e n  \ni n  t h e  p e l v i c  p e r i t o n e u m  o r  o v a r i e s  [ 1 ] .  T h i s  d i s o r d e r  i s  a n  e s t r o g e n - d e p e n d e n t  b e n i g n  g y n e c o l o g i c a l  d i s e a s e  \no f r e p r o d u c t i v e  a g e .  E n d o m e t r i o s i s  i s  l i n k e d  t o  p e l v i c  p a i n  a n d  i n f e r t i l i t y  [ 2 ] .  O v a r i a n  e n d o m e t r i o m a  ( O E )  \np r e s e n t s  a n  i n c r e a s e d  r i s k  o f  e n d o m e t r i o s i s 喧 a s s o c i a t e d o v a r i a n  c a n c e r  ( E A O C ) ,  p r e d o m i n a n t l y  i n  \ne n d o m e t r i o i d  a n d  c l e a r  c e l l  c a r c i n o m a s  [ 3 , 4 ) .  U n o p p o s e d  e x p o s u r e  t o  e s t r o g e n  m a y  b e   a n  i m p o r t a n t  s t e p  \nt o w a r d  u n d e r s t a n d i n g  i t s  p o t e n t i a l  i m p l i c a t i o n s  f o r  e n d o m e t r i o i d  c a r c i n o m a  o f  t h e  o v a r y  [ 4 ] .  O v a n a n  \ne n d o m e 位i o m a a l s o  p l a y s  a  r o l e  i n  t h e  d e v e l o p m e n t  o f  c l e a r  c e l l  c a r c i n o m a  ( C C C )  w i t h  ti m e .  I n  J a p a n ,  t h e  \nm匂o r i t y （ ～ 8 0 % )  o f  E A O C  h a d  C C C  w i t h  e a r l y  s t a g e  t u m o r s  [ 5 ] .  A  p a 也o l o g i c a l e v a l u a t i o n  o f  s p e c i m e n s  \no f  E A O C  d e m o n s t r a t e d  t h e  t r a n s f o n n a t i o n  p r o c e s s 合o m b e n i g n  e n d o m e t r i o s i s  t h r o u g h  a句r p i c a l \ne n d o m e t r i o s i s  t o  o v a r i a n  c a n c e r  i n  a  s t e p w i s e  m a n n e r .  T h u s ,  b e n i g n  O E  i s  r e g a r d e d  a s  b e i n g  p o t e n t i a l l y  \nm a l i g n a n t  a n d  a s s o c i a t e d  w i t h  i n c r e a s 巴dr i s k  o f  o v a r i a n  c a n c e r  [ 2 , 3 ,5 , 6 ] .  T h e  p r o g r e s s i v e  a c c u m u l a t i o n  o f  \na c q u i r e d  e p i g e n e t i c  a n d  g e n e t i c  a l t e r a t i o n s  w a s  i d e n t i f i e d  a l o n g  t h e  e n d o m e t r i o s i s - c a r c i n o m a  s e q u e n c e  [ 7 ] .  \nT u m o r  o r i g i n a t e s  a n d  p r o g r e s s e s  a t  t h e  s i t e  o f  c h r o n i c  i n f l a m m a t i o n  a n d  o x i d a t i v e  s t r e s s  t h a t  c r e a t e  \np r o c a r c i n o g e n i c  a n d  p r o a n g i o g e n i c  t u m o r  m i c r o e n v i r o n m e n t  b y  i n d u c i n g  D N A  d a m a g e  a n d  r e p a i r  [ 6 ] .  I n  \nr e c e n t  y e a r s ,  e v i d e n c 巴 h a s e m e r g e d  t h a t ,  i n  e n d o m e t r i o s i s ,  h e m o g l o b i n ,  h e m e  a n d  i r o n  o v e r l o a d  r e s u l t i n g  \nf r o m  r e p e a t e d  e p i s o d e s  o f  h e m o r r h a g e  m a y  c r e a t e  d i s r u p t i o n  o f  t h e  h o m e o s t a t i c  r e d o x  c i r c u i t s  a n d  o x i d a t i v e  \ns t r e s s ,  w h i c h  p r o m o t e s  D N A  m u t a t i o n s  o r  i n d u c e s  D N A  d a m a g e  a n d  g e n o m e  i n s t a b i l i t y ,  p o s s i b l y  t h r o u g h  \na u t o x i d a t i o n  a n d  F e n t o n  c h e m i s t r y  [ 6 , 8 ) .  T h e  a c c u m u l a t i o n  o f  D N A  d a m a g e  a n d  (  e p i ) g e n e t i c  d e f e c t s  ma y  \ne m e r g e  b a s e d  o n  p r o f o u n d  c h a n g e s  o f  m i c r o e n vi r o n m en t .  R e d o x ・a c t i v e i r o n  c o u l d  i n d u c e  o x i d a t i v e  s t r e s s ,  \nr e s u l t i n g  i n  t h e  d e v e l o p m e n t  o f  C C C  o f  t h e  o v a η ／  [ 9 ] .  \n8・h y d r o x y - 2 ' - d e o x y g u a n o s i n e ( 8 - 0 H d G )  i s  a  p o t e n t i a l  b i o m a r k e r  o f  D N A  o x i d a t i v e  d a m a g e  f o r  v a r i o u s  \nd i s e a s e s ,  i n c l u d i n g  a t h e r o s c l e r o s i s ,  d i a b e t e s ,  s m o k i n g  a n d  c a n c e r s  [ 1 0 ) .  8・O H d G m i g h t  h a v e  a  h i g h  \np r o b a b i l i t y  o f h a n n f u l  e f f e c t s  i n  s o m e  c e l l s ,  b u t  i t  a l s o  a c t s  a s  a  d e f e n s e  m e c h a n i s m  a g a i n s t  o x i d a t i v e  s t r e s s  \ni n  o t h e r  c e l l s .  F o r  e x a m p l e ， せ i e e x p r e s s i o n  o f  n u c l e a r ふO H d G w e r 巴 d o w n r e g u l a t e d i n  E A O C  t u m o r o u s  \nt i s s u e  c o m p a r e d  w i t h  O E  a n d  E A O C  e n d o m e 住i o t i c t i s s u e  [  1 1 ] .  H o w e v e r ,  l i m i t e d  i n f o n n a t i o n  i s  s t i l l  \na v a i l a b l e  a b o u t  t h e  e x p r e s s i o n  o f  8・O H d G p r o t e i n  b e t w e e n  O E  a n d  b e n i g n  e n d o m e t r i o t i c  l e s i o n s  a d j a c e n t  \nt o  t h e  c l e a r  c e l l  c a r c i n o m a  ( C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s ) .  \nC D 4 4  i s  t h e  m句o r c e l l  s u r f a c e  r e c e p t o r  f o r  h y a l u r o n a n  a n d  b e c o m e s  a  v a l i d  c a n c e r  s t e m  c e l l  m a r k e r .  T h i s  \nm o l e c u l e  e x e r t s  p o t e n t i a l  p r o t 巴c t i v e e f f e c t  a g a i n s t  R O S - m e d i a t e d  D N A  d a m a g e  [  1 2 ) .  E x p r e s s i o n  o f  C D 4 4 ,  \ne s p e c i a l l y  v a r i a n t  i s o f o n n s  ( C D 4 4 v ) ,  c o n t r i b u t e s  t o  R O S  d e f e n s e  t h r o u g h  u p r e g u l a t i o n  o f  t h e  s y n t h e s i s  o f  \nr e d u c e d  g l u t a 白1 0 n e ( G S H ) ,  t h e  p r i m a r y  i n t r a c e l l u l a r  a n t i o x i d a n t  [ 1 2 ) .  C D 4 4 v  d i r e c t l y  bi n d s  t o  a n d  \ns t a b i l i z e s  x C T ,  a  s u b u n i t  o f  a  g l u t a m a t e 幽 c y s t i n e t r a n s p o r t e r ,  t h a t  r e s u l t s  i n  a c c u m u l a t i o n  o f  a n t i o x i d a n t s  a n d  \np r o t e c t i o n  a g a i n s t  o x i d a t i v e  s t r e s s - r e l a t e d  p a t h o l o g i e s  [ 1 3 ) .  A b e r r a n t  a l t e r n a t i v e  s p l i c i n g ,  C D 4 4 v ,  i s  V巴r y \nc o m m o n  i n  c a n c e r  a n d  a s s o c i a t e d  w i t h  m a l i g n a n t  t r a n s f o n n a t i o n ,  s u r v i v a l  i n  t h e  R O S - g e n e r a t e d  w o r s e  \ne n v i r o n m e n t ,  a g g r e s s i v e n e s s  a n d  m e t a s t a s i s  [ 1 3 , 1 4 ] .  A m o n g  s p l i c e  v a r i a n t  i s o f o r m s ,  C D 4 4 v 9  e x h i b i t e d  \n\no v a r i a n  c a n c e r 叩 e c i f i c e x p r e s s i o n  p a t t e r n s ,  b u t  n o t  n o r m a l  o v a r i a n  t i s s u e s  [ 1 5 ] .  T h e s e  v a r i a n t  f o r m s  a r e  \na l s o  i n v o l v e d  i n  t h e  d e v e l o p m e n t  o f  e n d o m e t r i o t i c  l e s i o n  [ 1 6 ] .  M e c h a n i s m s  i n v o l v e d  i n  o x i d a t i v e  s t r e s s  \nt o g e t h e r  w i t h  C D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n  i n  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s  h a v e  n o t  b巴e n i n v e s t i g a t e d  s o  f a r .  \nH e r e  w e  f o c u s e d  o n  t h e  e x p r e s s i o n  o f  t h e  a n t i o x i d a n t  m a r k e r ,  C D 4 4 v 9 ,  a n d  t h e  i n f l u e n c e  o f  o x i d a t i v e  D N A  \nd a m a g e  m a r k e r ,  8 - 0 H d G ,  l巴v e l s i n  O E  a n d  t h e  b e n i g n  e n d o m e t r i o t i c  l e s i o n s  a d j a c e n t  t o  C C C .  \nM e t h o d s  \nT i s s u e  s a m p l e s  \nT h e  s a m p l e s  c o n s i s t e d  o f  s u r g i c a l l y  r e s e c t e d  t i s s u e s  f r o m  h o s p i t a l i z e d  p a t i e n t s .  N o  p a t i e n t s  u n d e r w e n t  \nh o r m o n a l  t h e r a p y  o r  c h e m o t h e r a p y  f o r  s i x  m o n t h s  p r i o r  t o  t h e  s u r g e r y .  A  t o t a l  o f   3 5  f o r m a l i n - f i x e d ,  \np a r a f i 自 任 e m b e d d e d t i s s u e  s p e c i m e n s ,  i n c l u d i n g  2 7  c a s e s  o f  b e n i g n  O E  a n d  8  c a s e s  o f  e n d o m e t r i o s i s - \na s s o c i a t e d  C C C ,  w e r e  r e t r o s p e c t i v e l y  c o l l e c t e d  企o m D巴p a r t m e n t o f  G y n e c o l o g y  a t  N a r a  M e d i c a l  \nU n i v e r s i t y  h o s p i t a l ,  J a p a n ,  b e t w 巴e n J a n u a r y  2 0 0 6  a n d  D e c e m b e r  2 0 1 2 .  E n d o m e t r i o t i c  t i s s u e  c o m p a r t m e n t  \nw a s  t a r g e t e d  a s  r e l e v a n t  r e g i o n s  o f  i n t e r e s t  f o r  i m m u n o h i s t o c h e m i c a l  a n a l y s i s  i n  r e l a t i o n  t o  th e  \ne n d o m e t r i o t i c  e p i t h e l i a l  c e l l s  o f  b e n i g n  O E  a n d  e n d o m e t r i o t i c  l e s i o n s  a d j a c e n t  t o  C C C  t u m o r o u s  t i s s u e  \n( C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s ) .  \nC C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s  w e r e  s e l e c t e d  f r o m  t h e  r e s e c t e d  o v a r y  o f  p a t i e n t s  w i t h  C C C ,  w h i c h  i n c l u d e s  \ne n d o m e t r i o s i s  a p p e a r i n g  e p i t h e l i a l  c e l l s  a d j a c e n t  t o  t h e  p r i m a r y  t u m o r  s i t e .  \nE n d o m e t r i o s i s  w a s  p r e s e n t  a d j a c e n t  t o 出e C C C .  T h e  d a t a  o f  p a t i e n t  d e m o g r a p h i c  f e a t u r e s  a n d  \nc l i n i c o p a t h o l o g i c  c h a r a c t e r i s t i c s  w e r e  c o l l e c t e d  f r o m  a  d a t a b a s e  c o n t a i n i n g  c o m p r e h e n s i v e  m e d i c a l  r e c o r d s  \na n d  p a t h o l o g y  r e p o r t s .  T h e  p r o t o c o l s  w e r 巴 a p p r o v e d b y  T h e  E t h i c s  C o m m i t t e e  o f  N a r a  M e d i c a l  U n i v e r s i t y  \n( r e f e r e n c e  n u m b e r :  2 0 1 2 ・5 4 1 ) . W r i t t e n  i n f o r m e d  c o n s e n t  w a s  o b t a i n e d 企o m a l l  p a t i e n t s .  \nI m m u n o h i s t o c h e m i s t r y  \nT h r e e  p a r a 茄 ns e c t i o n s  o f  s e r i a l  4  μ m  t h i c k n e s s  w e r e  t a k e n  合o m e a c h  o r i g i n a l  b l o c k ,  o n e  s e c t i o n  w a s  \ns t a i n e d  w i t h  h e m a t o x y l i n  a n d  e o s i n  f o r  d i a g n o s t i c  c o n f o m a t i o n  a n d  t h e  o t h e r  t w o  s e c t i o n s  w e r e  \ni m m u n o s t a i n e d  f o r  C D 4 4 v 9  a n d  8 - 0 H d G  b y  i m m u n o e n z y m e  p o l ym e r  m e t h o d s  a n d  co n ve n t i o n a l  m e t h o d s ,  \nr e s p e c t i v e l y ,  u s i n g  a n  a v i d i n  b i o t i n  c o m p l e x  i m m u n o p e r o x i d a s e  t巴c h n i q u e .S l i d e s  w e r e  d e p a r a f f i n i z e d  a n d  \nr e h y d r a t e d ,  i n c u b a t e  i n  3 %  H 2 0 2  i n  m e t h a n o l  t o  b l o c k  e n d o g e n o u s  p e r o x i d a s e .  A n t i g e n  r e t r i e v a l  w a s  \np e r f o r m e d  b y  a u t o c l a v i n g  a t  1 2 0 ° C  f o r  1 0  m i n  i n  0 . 0  l M  s o d i u m  c i t r a t e  b u f f e r  ( p H  6 . 0 ) .  T h e y  w e r e  b l o c k e d  \nw i t h  s e r u m - f r e e  p r o t e i n  b l o c k  s o l u t i o n  ( D a k o  #X 0 9 0 9 )  f o r  t e n  m i n u t e s  a n d  t h e n  p r o b e d  w i t h  p r i m a r y  \na n t i b o d y  C D 4 4 v 9  ( g i ve n  b y  p r o f e s s o r  D r .  S a y a  H  b e l o n g i n g  t o  D i v i s i o n  o f  G e n e  R  e g u l a ti o n ,  I n s t i t u t e  f o r  \nA d v a n c e d  M e d i c a l  R e s e a r c h ,  S c h o o l  o f  M e d i c i n e ,  K e i o  U n i v e r s i t y ,  T o k y o ,  J a p a n )  a t  a  d i l u t i o n  o f  1 :  1 2 5 0 0  \nf o r  o n e  h o u r ,  f o l l o w e d  b y 出eE n V i s i o n +  K i t s  ( D A K O  # K 4 0 0 6 1 1 ・2 ) f o r  3 0  m i n u t e s ,  a n d  t h e  D A B  \nc h r o m o g e n  ( D a k o ,  # K 3 4 6 71 1 ・2 ) f o r  t e n  m i n u t e s .  F u r t h e r m o r e ,  o t h e r  s l i d e s  w e r e  p r o b e d  w i t h  p r i m 紅 y\n\na n t i b o d y  8・O H d G ( a b e a m ,  a b 4 8 5 0 8 )  a t  a  d i l u t i o n  o f  1  : 2 0 0  f o r  o n e  h o u r ,  f o l l o w e d  b y  t h e  b i o t i n y l a t e d  r a b b i t  \na n t i - m o u s e  I g G  ( N i c h i r e i  C o r p o r a t i o n  #  4 2 4 0 2 1 ・ （ 2 ) ) f o r  1 0  m i n u t e s ,  t h e n  b y  t h e  p e r o x i d a s e - l a b e l e d  \ns t r e p t a v i d i n  ( N i c h i r e i  C o r p o r a t i o n  #  4 2 4 0 2 1 ・ （ 3 ) ) f o r  7  m i n u t e s ,  a n d  t h e  D A B  c h r o m o g e n  ( N i c h i r e i  \nC o r p o r a t i o n  # 4 1 5 1 7 1 )  f o r   t e n  m i n u t e s .  T h e  p r i m a r y  a n t i b o d i e s  w e r e  r e p l a c e d  w i t h  P B S  f o r  n e g a t i v e  \nc o n t r o l  e x p e r i m e n t s .  T h e  s l i d e s  w e r e  c o u n t e r s t a i n e d  w i t h  h e m a t o x y l i n ,  a n d  m o u n t e d  u n d e r  c o v e r s l i p s  w i t h  \np e r m o u n t .  \nP r o t e i n  e x p r e s s i o n  w a s  e v a l u a t i o n  b y  2  i n d e p e n d e n t  o b s e r v e r s  (K S  a n d  C Y ) .  F i v e  h i g h  p o w d e r  f i 巴I d s w e r e  \nc h o s e n  f o r  e a c h  s a m p l e  a n d  1 0 0 0  e p i t h e l i a l  c e l l s  w e r e  e v a l u a t e d .  T o  d e t e r m i n e  t h e  e x p r e s s i o n  o f  t h e  p r o t e i n s  \ni n  a  s e c t i o n ,  t h e  s p e c i m e n s  w e r e  s c o r e d  a c c o r d i n g  t o  t h e  s t a i n i n g  i n t e n s i ザ a n d t h e  p e r c e n t a g e  o f  p o s i t i v e  \nc e l l s  u s i n g  a  s e m i - q u a n t i t a t i v e  s c o r i n g  a p p r o a c h .  S i n c e  m o s t  o f  t h e  s t a i n i n g  i n t e n s i t y  w e r e  m o d e r a t e  b r o w n  \np a r t i c l e s ,  t h e  i n t e n s i t y  o f  s t a i n i n g  w a s  d i v i d e d  i n t o  n o  s t a i n i n g  ( a  s c o r e  o f  0 )  a n d  s t a i n i n g  ( a  s c o r e  o f  1 ) ,  \nr e s p e c t i v e l y .  I n  a d d i t i o n ,  t h e  p e r c e n t a g e  o f  p o s i t i v e  c e l l s  i n  e a c h  s a m p l e  w a s  d巳f i n e d a s  t h e  r a t i o  o f  \np o s i t i v e l y  s t a i n e d  e n d o m e t r i o t i c  e p i t h e l i a l  c e l l s  t o  a l l  e n d o m e t r i o ti c  e p i t h e l i a l  c e l l s .  T h e  p e r c e n t a g e  o f  \np o s i t i v e  c e l l s  w a s  s c o r e d  a t  f o u r  l e v e l s :  0  f o r く 5 % , 1  f o r  5 - 3 0 % ,  2  f o r  3 1 - 6 0 % ,  a n d  3  f o r と6 1 %  [ 1 7 ] .  T h e  \nr e s u l t s  w e r e  c a l c u l a t e d  i n  a l l  t h e  p a t i e n t s  a n d  w e r e  e x p r e s s e d  a s  t h e  m e a n 土 s t a n d a r d d e vi a t i o n  ( S D ) .  T h e s e  \nt w o  v a l u e s  ( t h e  s t a i n i n g  i n t e n s i t y  a n d  p e r c e n t a g e  o f  p o s i t i v e  c e l l s )  w e r e  c o m b i n e d  t o  d巴c i d e t h e  e x p r e s s i o n  \no f  p r o t e i n s  i n  e a c h  g r o u p  ( t h e  s c o r e  < 2  r e p r 巴s e n t s n e g a t i v e  a n d 三2r e p r e s e n t s  p o s i t i v e ) .  \nS t a t i s t i c a l  a n a l y s i s  \nN u m e r i c a l  v a r i a b l e s ,  i n c l u d i n g  a g e ,  w e r e  p r e s e n t e d  a s  t h e  m e a n 土 S D . V a r i a b l 巴St h a t  d i d  n o t  p r e s e n t  n o r m a l  \nd i s t r i b u t i o n  w e r e  e x p r 巴s s e d b y  m e d i a n ,  m i n i m u m  a n d  m a x i m u m  v a l u e s .  D i f f e r e n c e s  b e t w e e n  t h e  g r o u p s  \no f  p a t i e n t s  w e r e 巴s t i m a t e d b y  M a n n - W h i t n e y  U  t e s t .  C a t e g o r i c a l  d a t a  w e r e  a n a l y z e d  b y  t h e  C h トs q u a r e t巴s t \no r  t h e  F i s h e r ’s  2 ・t a i l e d t e s t .  T h e  p e r c e n t a g e  o f  C D 4 4 v 9  a n d  ふO H d G p o s i t i v e  c e l l s  p r e s e n t e d  n o r m a l  \nd i s t r i b u t i o n ,  a n d  c o r r e l a t i o n  b e t w e e n  C D 4 4 v 9  a n d  8・O H d G w a s  e v a l u a t e d  b y  P e a r s o n  c o r r e l a t io n  \nc o 巴 妊 i c i e n t . A n a l y s e s  w e r e  p e r f o r m e d  b y  S P S S  v e r s i o n  2 1 . 0  ( I B M  S P S S ,  A r m o n k ,  N Y ,  U S A ) .  T w o - s i d e d  \nPく0 . 0 5 w a s  c o n s i d e r e d  t o  i n d i c a t e  a  s t a t i s t i c a l l y  s i g n i f i c a n t  d i f f e r e n c e .  \nR e s u l t s  \nS t u d y  p o p u l a t i o n  \nT h e  s t u d y  p o p u l a t i o n  c o n s i s t e d  o f  2 7  p a t i e n t s  wi t h  b e n i g n  O E  a n d  8  p a t i e n t s  w i t h  C C C  e n d o m e t r i o t i c  \nt i s s u e s .  T h e  c l i n i c o p a t h o l o g i c a l  c h a r a c t e r i s t i c s  o f  t h e  t w o  g r o u p s  o f  p a t i e n t s  a r e  s h o w  n  i n  T a b l e  1 .  T h e  \np a t i e n t  a g 巴 （ p=  0 . 0 0 1 ) ,  p r e m e n o p 加 s a l s t a 旬 s( p  =  0 . 0 1 1 ） 加 d  a  m a x i m u m  d i a m e t e r  o f  t h e  c y s t  ( p  =  0 . 0 1 7 )  \nd i f f e r e d  s i g n i f i c a n t l y  b e t w e e n  p a t i e n t s  w i t h  E C  a n d  C C C .  P a r i t y  a n d  s e r u m  C A 1 2 5  l e v e l s  d i d  n o t  d i f f e r  \nb e t w e e n  t h e  t w o  g r o u p s .  \n\nC D 4 4 v 9  a n d  8・O H d G p r o t e i n  e x p r e s s i o n  \nI m m u n o h i s t o c h e m i c a l  a n a l y s i s  o f  C D 4 4 v 9  a n d  8・O H d G e x p r e s s i o n  w a s  s h o w n  i n  F i g u r e  l .  C D 4 4 v 9  w a s  \ne x p r e s s e d  o n  t h e  c e l l  m e m b r a n e  i n  e n d o m e t r i o t i c  e p i t h e l i a l  c e l l s .  E n d o m e t r i o t i c  s t r o m a l  c e l l s  w e r e  n e g a t i v e  \nf o r  C D 4 4 v 9  s t a i n i n g .  8 - 0 H d G  w a s  r e s t r i c t e d  t o  t h e  n u c l e u s .  8- 0 H d G  w a s  i d e n t i f i e d  i n  e n d o m e t r i o t i c  \ne p i t h e l i u m  a n d  s t r o m a ,  a n d  i t s  e x p r e s s i o n  w a s  g r e a t e r  i n  e p i t h e l i a l  c e l l s  t h a n  i n  s t r o m a l  c e l l s .  T h 巴 s t a i n i n g \nw a s  p a r t i a l l y  p o s i t i v e  i n  e n d o m e t r i o t i c  s t r o m a l  c e l l s .  T h e r e f o r e ,  o n l y  c e l l  m e m b r a n e  a n d  n u c l e a r  s t a i n i n g  \ni n  e n d o m e t r i o t i c  e p i t h e l i a l  c e l l s  w e r e  e v a l u a t e d .  \nT h e  r e s u l t s  o f C D 4 4 v 9  a n d  8 - 0 H d G  e x p r e s s i o n  i n  t w o  g r o u p s  w e r e  s u m m a r i z e d  i n  T a b l e  2 .  O f  t h e  2 7  O E  \ns p e c i m e n s ,  2 4  h a d  C D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n ,  w i t h  a  p o s i t i v e  r a t e  o f  8 8 . 9 %  ( 2 4 / 2 7 ) ,  w h i l e  t h e  p o s i t i v e  r a t e  o f  \nC D 4 4 v 9  w a s  2 5 .0 %  ( 2 /8 )   i n  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e  s p e c i m e n s .  C e l l  m e m b r a n e  C D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n  w a s  \nm a r k e d l y  d o w n r e g u l a t e d  i n  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s .  T h e  m e a n  （ 土 S D ) p e r c e n t a g e  o f  C D 4 4 v 9  p o s i t i v e  \nc e l l s  i n  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s  w a s  s i g n i f i c a n t l y  l o w e r  t h a n  t h a t  i n  b e n i g n  E C  ( 6 8 . 5 士 2 0 . 2 % v e r s u s  \n1 6 . 7  ±  1 6 . 5 % ,  pく 0 . 0 0 1 ) . \n8・O H d G i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y  w a s  a l s o  a v a i l a b l e  i n  3 5  c a s e s .  N u c l e a r  8・O H d G p o s i t i v e  s t a i n i n g  w a s  \np r 巴s e n t i n  2 6  E C  p a t i e n t s  ( 2 6 /2 7 ,  9 6 . 3 % )  a n d  1 0 0 %  ( 8 / 8 )  o f  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s  ( P  =  0 . 7 7 1 ) ,  w h i c h  \nw a s  u s u a l l y  m o d e r a t e  s t a i n i n g .  H o w e v e r ,  t h e  p e r c e n t a g e  o f  t h e  8・O H d G - p o s i t i v e e n d o m e 仕i o t i c e p i t h e l i a l  \nc e l l s  w a s  s i g n i f i c a n t l y  h i g h e r  i n  t h e  C C C  g r o u p  t h a n  i n 出eO E  g r o u p  ( 9 4 . 9 土 3. 0 %v e r s u s  7 7 . 3 土 2 2 . 5 % , p  \n=  0 . 0 4 9 ) .  \nW e  a n a ly z e d  t h e  c o r r e l a t i o n  o f  t h e  p e r c e n t a g e  ( % )  o f  t h e  p o s i t i v e  C D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n  w i t h  t h a t  o f  t h e  \np o s i t i v e  8 - 0 H d G  e x p r e s s i o n  i n  t h e  t w o  g r o u p s .  A  s i g n i f i c a n t  n e g a t i v e  c o r r 巴l a t i o n b e t w e e n  C D 4 4 v 9  a n d  8・\nO H d G  e x p r e s s i o n  w a s  i d e n t i f i e d ,  w i t h  a  c o r r e l a t i o n  c o e f f i c i e n t  o f - 0 . 4 5 8  ( P  =  0 . 0 0 6 )  ( F i g u r e  2 )  \nD i s c u s s i o n  \nW e  p e r f o r m e d  i m m u n o h i s t o c h e m i c a l  s t a i n i n g  o f  C D 4 4 v 9  a n d  8 - 0 H d G  i n  p a r a f f i n - e m b e d d 巴dt i s s u e s  o f  \nO E  a n d  t h e  b e n i g n  e n d o m e 仕i o t i c l e s i o n s  a d j a c e n t  t o  C C C .  A  h i g h  l e v e l  o f  8 - 0 H d G  p r o t e i n  e x p r e s s i o n  w a s  \nf o u n d  i n  e n d o m e 位i o t i c e p i t h e l i a l  c e l l s  o f  t w o  g r o u p s ,  w h i l e  t h e  C D 4 4 v 9  i m m u n o r e a c t i v i t y  w a s  s i g n i f i c a n t l y  \nl o w e r  i n  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s  c o m p a r e d  t o  b e n i g n  O E .  O u r  d a t a  s u g g e s t  t h a t  t h e  d o w n r e g u l a t i o n  o f  \nC D 4 4 v 9  a n d  t h e  u p r e 忽i l a t i o n o f  8 - 0 H d G  i n  O E  le s i o n s  m a y  p r o v i d e  a n  e x c e s s  o x i d a t i v e  s t r e s s  a n d  f u t u r e  \nr i s k  o f  m a l i g n a n t  s t e p .  \nO x i d a t i v e  s t r e s s  i s  c o n s i d e r e d  t o  b e   a n  i m p o r t a n t  t r i g g e r  f o r  e n d o m e t r i o s i s  c a r c i n o g e n e s i s  [ 1 8 ) .  R e p e a t e d  \ne p i s o d e s  o f  h e m o r r h a g e  o c c u r  i n  e n d o m e t r i o s i s  a t  t h e  o n s e t  o f  m  e n s t r u a t i o n .  E x t r a c e l l u l a r  h e m o g l o b i n ,  \nh e m e ,  a n d  i r o n  s p e c i e s  i n  e n d o m e t r i o t i c  c y s t  c a u s e  D N A  d a m a g e  a n d  m u t a t i o n s ,  w h i c h  c r e a t e  i n c r e a s e d  \nc e l l u l a r  s u s c e p t i b i l i t y  t o  o x i d a n t ・m e d i a t e d c e l l  k i l l i n g  o r  c a r c i n o g e n e s i s  [ 6 ,8 , 1 8 , 1 9 ) .  N o t  o n l y  \ne n d o m e t r i o s i s  b u t  a l s o  g e n e t i c  h e m o c h r o m a t o s i s ,  c h r o n i c  v i r a l  h e p a t i t i s  a n d  a s b e s t o s i s  i n d u c e  i r o n  o v e r l o a d  \na n d  h a v e  b e e n  a s s o c i a t e d  w i t h  i r o n - i n d u c e d  c a r c i n o g e n e s i s  [ 2 0 ] .  8 - 0 H d G  i s  a n  e s t a b l i s h e d  m a r k e r  o f  \n\nd e g r e e  o f  D N A  o x i d a t i v e  d a m a g e .  C y s t  f l u i d  h e m o g l o b i n  a n d  i r o n  o v e r l o a d  m a y  b e  a s s o c i a t e d  w i t h  t h e  \nu p r e g u l a t i o n  o f  8・O H d G i n  O E  l e s i o n s  [ 8 ,  1 9 ] .  O u r  d a t a  a r e  c o n s i s t e n t  w i t h  p r e v i o u s  s t u d i e s  r e p o r t i n g  t h a t  \no x i d a t i v e  s t r e s s  i s  u p r e g u l a t e d  i n  e n d o m e t r i o s i s - a s s o c i a t e d  C C C  c a r c i n o g e n e s i s  [ 1 8 ] .  T h e  c o ・r e g u l a t i o n a n d  \nf i n e - t u n i n g  o f  o x i d a t i v e  s t r e s s  a n d  a n t i o x i d a n t s  m a y  b e  m o r e  p r e d i c t i v e  o f  e n d o m e t r i o s i s - c a r c i n o m a  \ns e q u e n c e  p r o g r e s s i o n  [ 1 9 ] .  C D 4 4 v 9  m a y  p l a y  a  c r i t i c a l  r o l e  a s  a  s u p p r e s s o r  o f  C C C  c a r c i n o g e n e s i s  i n  \nb e n i g n  O E .  A n t i o x i d a n t  s仕a t e g y m a y  b e  v i e w e d  a s  a n  a p p r o a c h  t o  p r e v e n t  m a l i g n a n t  t r a n s f o r m a t i o n  o f  \ne n d o m e t r i o s i s .  \nT h i s  s t u d y  h a s  l i m i t a t i o n s .  F i r s t l y ,  t h e  s c o p e  o f  t h e  p r e s e n t  s t u d y  w a s  l i m i t e d  t o 巴n d o m 巴t r i o t i c e p i t h e l i a l  \nc e l l s  i n  b e n i g n  O E  a n d  b e n i g n  e n d o m e t r i o t i c  l e s i o n s  n e x t  t o  c l e a r  c巴1 1 c a r c i n o m a .  I n  o r d e r  t o  i n v e s ti g a t e  \nt h e  r o l e  o f  C D 4 4v 9  a n d  8 ・O H d G i n  C C C  c a r c i no g e n e s i s ,  w e  f o c u s e d  ou r  at t e n t i o n  t o  t h e  D N A  o x i d a t i v e  \nd a m a g e  a n d  a n t i - o x i d a n t  p r o p e r t i e s  i n  C C C  en d o m e t n o t i c  t i s s u e s .  A c t u a l l y ,  w e  a t t e m p t e d  t o  c o m p a r e  t h e  \ne x pr e s s m n  o f  t h e s e  p r o t ei n s  a m  o n g  O E  gr o u p s ラ C C C e n d o m e t T i o t i c  t i s s u e s  a n d  C C C  t u m  o r  t i ss u e s .  A n d  \nm o r e  p r o m i n e n t  d i f f e r e n c e  w a s  o b s e r v e d  b e t w e e n  O E  a n d  C C C  en d o m 巴tr i o t i ct i s s u e s  t h a n  O E  a n d  C C C  \nh 1 m o r  t i s s u e s  （ ’ T a b l e  3 ) .  M o r e o v e r ,  o u r  d a t a  sh o w e d  t h a t  t h e  e x p r e s s i o n  o f  8・O H d G i n c r e a s e d  i n  E A O  C  \n巴n d o m e t ri o t i c t i s s u 巴 t h a n O  E  g r o u p s .  Th i s  r e s u l t  i s  n o t  c o n 仕a r y t o  t h e  p r e v i o u s  r e p o r t  t h a t  c y s t  f l u i d  \nhe m o g l o b i n  a n d  i r o n  o v e r l o a d  a r e  m o r e  s e v e r e  i n  O E  t h a n  E A O C  [ 8 , 1 9 ] .  \nS e c o n d l y ,  t h e  n u m b e r  o f  s a m p l e s  w a s  r e l a t i v e l y  s m a l l .  I n  t h e  8  c a s e s  w i t h  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s ,  a  \nd i r e c t  c o n t i n u o u s  t r a n s i t i o n  w a s  n o t e d 企o m c l e a r l y  b e n i g n  e n d o m e t r i o s i s  t h r o u g h  a t y p i c a l  e n d o m e t r i o s i s  \nt o  C C C .  T h 巴l i m i t a t i o n c a n  b e  a d d r e s s e d  i n  t h e  h旬r e w i t h  v a l i d a t i o n  i n c o r p o r a t i n g  a  l a r g 巴rs a m p l e  s i z e  o f  \nC C C  w i t h  m o r p h o l o g i c  d o c u m e n t a t i o n  o f  t h e  c o n t i n u o u s  t r a n s i t i o n .  F i n a l l y ,  w e  f o u n d  i n s u f f i c i e n t  e v i d e n c e  \nt o  c o n f i r m  w h e t h e r  r e s u l t s  a r e  m o r e  o r  l e s s  a p p l i c a b l e  f o r  v a r i o u s  s u b g r o u p s  o f E A O C .  T h e  s t u d y  e n r o l l e d  \np a t i e n t s  w i t h  C C C ;  t h e r e f o r e ,  r e s u l t s  m a y  n o t  b e  a p p l i c a b l e  t o  p a t i e n t s  w i t h  e n d o m e t r i o s i s - a s s o c i a t e d  \ne n d o m e t r i o i d  c a r c i n o m a .  W e  m u s t  e x e m p l i f シw h e t h e r t h e  C D 4 4 v 9  p r o t e i n  e x p r e s s i o n  h a s  b e e n  \nd o w n r e g u l a t e d ,  p o t e n t i a l l y  d u e  t o  i t s  p r i m a r y  r e g u l a t i o n  b y  e p i g e n e t i c  o r  g e n e t i c  m e c h a n i s m s .  \nN o t w i t h s t a n d i n g  t h e s e  l i m i t a t i o n s ,  r e d u c e d  e x p r e s s i o n  o f  C D 4 4 v 9  m a y  b e  a s s o c i a t e d  w i t h  m a l i g n a n t  \nt r a n s f o r m a t i o n  o f  b e n i g n  O E .  \nI n  c o n c l u s i o n ,  p r e s e n t  o b s e r v a t i o n s  d e m o n s t r a t e d  t h a t  d o w n r e g u l a t i o n  o f  C D 4 4 v 9  a n d  u p r e g u l a t i o n  o f  8・\nO H d G  m a y  b e  a s s o c i a t e d  w i t h  t u m o r  m i c r o e n v i r o n m e n t  o f  e n d o m et r i o s i s - a s s o c i a t e d  C C C  c a r c i n o g e n e s i s .  \n\nA c k n o w l e d g e m e n t s  \nT h i s  w o r k  w a s  s u p p o r t e d  b y  J S P S  K A K E N H I  G r a n t  N u m b e r  J P 1 6 K 1 1 1 5 0 ,  T a k e d a  S c i 巴n e e F o u n d a t i o n  \nT o h o k u  B u r e a u  o f  E c o n o m y ,  T r a d e  a n d  I n d u s t r y  a n d  K o n i c a  M i n o l t a  S c i e n c e  a n d  T e c h n o l o g y  F o u n d a t i o n  \ni n  2 0 1 7  \nD i s c l o s u r e  \nN o n e  d e c l a r e d .  \n\nR e f e r e n c e s  \n1 .  B u l u n  S E .  E n d o m e t r i o s i s .  N  E n g l  J  M e d  2 0 0 9 ;  3 6 0 ： ・ 2 6 8 - 7 9 . \n2 .  H i g a s h i u r a  Y ,  K a j i h a r a  H ,  S h i g e t o m i  H ,  K o b a y a s h i  H .  I d e n t i f i c a t i o n  o f  m u l t i p l e  p a t h w a y s  i n v o l v e d  i n  \nt h e  m a l i g n a n t  t r a n s f o r m a t i o n  o f  e n d o m e t r i o s i s .  O n c o l  L e t t  2 0 1 2 ;  4 :  3 - 9 .  \n3 .  B r i n t o n  L A ,  S a k o d a  L C ,  S h e r m a n  M E ,  e t  a l .  R e l a t i o n s h i p  o f  b e n i g n  g y n e c o l o g i c  d i s e a s e s  t o  \ns u b s e q u e n t  r i s k  o f  o v a r i a n  a n d  u t e r i n e  t u m o r s .  C a n c e r  E p i d e m i o l  B i o m a r k er s  P r e v  2 0 0 5 ;  1 4 :  2 9 2 9 ・3 5 . \n4 .  S o l i m a n  N F ,  H i l l a r d  T C .  H o r m o n e  r e p l a c e m e n t  t h e r a p y  i n  w o m e n  w i t h  p a s t  h i s t o r y  o f  e n d o m e 出 o s i s . \nC l i m a c t e r i c  2 0 0 6 ;  9 :  3 2 5 ・3 5 . \n5 .  K o b a y a s h i  H .  O v a r i a n  c a n c e r  i n  e n d o m e t r i o s i s :  e p i d e m i o l o g y ,  n a t u r a l  h i s t o r y ,  a n d  c l i n i c a l  d i a g n o s i s .  \nI n t  J  C l i n  O n c o l  2 0 0 9 ;  1 4 :  3 7 8 - 8 2 .  \n6 .  K o b a y a s h i  H .  P o t e n t i a l  s c e n a r i o s  l e a d i n g  t o  o v a r i a n  c a n c e r  a r i s i n g  f r o m  e n d o m e t r i o s i s .  R e d o x  R e p  \n2 0 1 6 ;  2 1 :  1 1 9 ・2 6 . \n7 .  K u r m a n  R J ,  S h i h  I e M .  M o l e c u l a r  p a t h o g e n e s i s  a n d  e x t r a o v a r i a n  o r i g i n  o f  e p i 也e l i a l o v a r i a n  c a n c e ト\ns h i 食m g t h e  p a r a d i g m .  H u m  P a t h o l  2 0 1 1 ;  4 2 :  9 1 8 ・3 1 . \n8 .  Y o s h i m o t o  C ,  l w a b u c h i  T ,  S h i g e t o m i  H  ,  K o b a y a s h i  H .  C y s t  f l u i d  i r o n - r el a t e d  c o m p o u n d s  a s  us e f u l  \nm a r k e r s  t o  d i s t i n g u i s h  m a l i g n a n t  t r a n s f o r m a t i o n  f r o m  b e n i g n  e n d o m e t r i o t i c  c y s t s .  C a n c e r  B i o m a r k  \n2 0 1 5 ;  1 5 :  4 9 3 - 9 .  \n9 .  K o s h i y a m a  M  ,  M a t s u m u r a  N ,  K o n i s h i  I .  Re c e n t  c o n c e p t s  o f  o v a r i a n  c a r c i n o g e n e s i s :  t y p e  I  a n d  t y p e  I I .  \nB i o m e d  R巴SI n t  2 0 1 4 ;  2 0 1 4 :  9 3 4 2 6 1 .  \n1 0 .  O c k  C Y ,  K i m  E H ,  C h o i  D J ,  L e e  H J ,  H a h m  K B ,  C h u n g  h任I . 8 - H y d r o x y d e o x y g u a n o s i n e :  n o t  m e r e  \nb i o m a r k e r  f o r  o x i d a t i v e  s t r e s s ,  b u t  r e m e d y  f o r  o x i d a t i v e  s t r e s s - i m p l i c a t e d  g a s t r o i n t e s t i n a l  d i s e a s e s .  \nW o r l d  J  G a s t r o e n t e r o l  2 0 1 2 ;  1 8 :  3 0 2 ”8 .  \n1 1 .  S o v a  H ,  K a n g a s  J ,  P u i s t o l a  U ,  S a n t a l a  M  ,  L i a k k a  A ,  K a r i h t a l a  P .  D o w n - r e g u l a t i o n  o f  8 - \nhy d r o x y d e o x y g u a n o s i n e  a n d  p e r o x i r e d o x i n  I I  i n  t h e  p a t h o g e n e s i s  o f  en d o m e t r i o s i s - a s s o c i a t e d  o v a r i a n  \nc a n c e r .  A n t i c a n c e r  R巴s2 0 1 2 ;  3 2 :  3 0 3 7 - 4 4 .  \n1 2 .  N a g a n o  0 ,  O k a z a k i  S ,  S a y a  H .  R e d o x  r e g u l a t i o n  i n  s t e m - l i k e  c a n c e r  c e l l s  b y  C D 4 4  v a r i a n t  i s o f o r m s .  \nO n c o g e n e  2 0 1 3 ;  3 2 :  5 1 9 1 ・3\n1 3 .  l s h i m o t o  T ,  N a g a n o  0 ,  Y a e  T ,  e t  al .  CD 4 4  v a r i a n t  r e g u l a t e s  r e d o x  s t a t u s  i n  c a n c e r  c e l l s  b y  s t a b i l i z i n g  \nt h e  x C T  s u b u n i t  o f  s y s t e m  x c （ ー ） a n d  t h e r e b y  p r o m o t e s  t u m o r  g r o w t h .  C a n c e r  C e l l  2 0 1 1 ;  1 9 :  3 8 7 - 4 0 0 .  \n1 4 .  P a u l i s  Y W ,  H u i j b e r s  E J ,  v a n  d e r  S c h a 丘D W ， 巴 ta l .  C D 4 4  e n h a n c e s  t u m o r  a g g r e s s i v e n e s s  b y  p r o m o t i n g  \nt u m o r  c e l l  p l a s t i c i t y .  O n c o t a r g e t  2 0 1 5 ;  6： ・ 1 9 6 3 4 - 4 6 . \n1 5 .  Y o r i s h i m a  T ,  N a g a i  N ,  O h a m a  K .  E x p r e s s i o n  o f  C D 4 4  a l t e r n a t i v e  s p l i c i n g  v a r i a nt s  i n  p r i m a 叩 a n d \nl y m p h  n o d e  m e t a s t a t i c  l e s i o n s  o f  g y n e c o l o g i c a l  c a n c e r .  H i r o s h i m a  J  M e d  S c i  19 9 7 ;  4 6 :  2 1 ・9 . \n1 6 .  G r i 伍 t h J S ,  L i u  Y G ,  T e k m a l  R R ,  B i n k l e y  P A ,  H o l d e n  A E ,  S c h e n k e n  R S .  M e n s t r u a l  e n d o m e t r i a l  c e l l s  \nf r o m  w o m e n  w i t h  e n d o m e t r i o s i s  d e m o n s t r a t e  i n c r e a s e d  a d h e r e n c e  t o  p e r i t o n e a l  c e l l s  a n d  i n c r e a s e d  \ne x p r e s s i o n  o f C D 4 4  s p l i c e  v a r i a n t s .  F e r t i l  S t e r i l  2 0 1 0 ;  9 3 ： ・ 1 7 4 5 ・9 . \n\n1 7 .  G o r d o n  I O ,  T r e t i a k o v a  M S ,  N o f f s i n g e r  A E ,  H a r t  J ,  R e u t e r  V E ,  A l - A h m a d i e  H A .  P r o s t a t e - s p e c i f i c  \nm e m b r a n e  a n t i g e n  e x p r e s s i o n  i n  r e g e n e r a t i o n  a n d  r e p a i r .  M o d  P a t h o l  2 0 0 8 ;  2 1 :  1 4 2 1 - 7 .  \n1 8 .  Y a m a g u c h i  K ,  M a n d a i  M ,  T o y o k u n i  S ,  e t  a l .  C o n t e n t s  o f  e n d o m e t r i o t i c  c y s t s ,  e s p e c i a l l y  t h e  h i g h  \nc o n c e n t r a t i o n  o f  f r e e  i r o n ,  a r e  a  p o s s i b l e  c a u s e  o f  c a r c i n o g e n e s i s  i n  t h e  c y s t s 出r o u g h t h e  i r o n - i n d u c e d  \np e r s i s t e n t  o x i d a t i v e  s t r e s s .  C l i n  C a n c e r  R e s  2 0 0 8 ;  1 4 ： ・ 3 2 ・4 0 .\n1 9 .  l w a b u c h i  T ,  Y o s h i m o t o  C ,  S h i g e t o m i  H  ,  K o b a y a s h i  H .  O x i d a t i v e  S t r e s s  a n d  A n t i o x i d a n t  D e f e n s e  i n  \nE n d o m e t r i o s i s  a n d  I t s  M a l i g n a n t  T r a n s f o r m a t i o n .  O x i d  M e d  C e l l  L o n g e v  2 0 1 5 ;  2 0 1 5 :  8 4 8 5 9 5 .  \n2 0 .  T o y o k u n i  S .  M y s t e r i o u s  l i n k  b e t w e e n  i r o n  o v e r l o a d  a n d  C D K N 2 A /2 B .  J  C l i n  B i o c h e m  N u t r  2 0 1 1 ;  4 8 :  \n4 6 - 9 .  \n\nF i g u r e  1  \nC D 4 4 v 9  a n d  8・O H d G i m m u n o r e a c t i o n s  i n  b e n i g n  O E  a n d  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s .  O r i g i n a l  \nm a g n i f i c a t i o n × 1 0 0  a n d × 4 0 0 .  A a n d  C ,  b e n i g n  O E . B a n d  D ,  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e .  A  a n d  B ,  C D 4 4 v 9  \ni m m u n o s t a i n i n g .  C  a n d  D  ,  8 ・O H d G i m m u n o s t a i n i n g .  \nC D 4 4 v 9 ;  C D 4 4  v a r i a n t  9 ,  8 ・O H d G ; 8 - h y d r o x y - 2 ’ － d e o x y g u a n o s i n e ,  O E ;  o v a r i a n  e n d o m e t r i o m a ,  C C C ;  c l e a r  \nc e l l  c a r c i n o m a .  \nF i g u r e  2  \nA  s i g n i f i c a n t  n e g a t i v e  c o r r e l a t i o n  b e t w e e n  C D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n  a n d  8・O H d G e x p r e s s i o n s  ( r = ・0 . 4 5 8 , \nP = 0 . 0 0 6 ) .  y  =  - 0 . 3 3  l x  +  9 9 . 9 9 7 .  x ,  t h e  p o s i t i v i t y  o f  C D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n ;  y ,  t h e  p o s i t i v i t y  o f  8・O H d G \ne x p r e s s i o n .  O p e n  c i r c l e  r e p r e s e n t s  a n  i n d i v i d u a l  v a l u e  o f  b e n i g n  O E .  C l o s e d  c i r c l e  r e p r 巴s e n t s 叩 i n d i v i d u a l \nv a l u e  o f  C C C 巴n d o m e t r i o t i c e p i t h e l i a l  c e l l s .  \nC D 4 4 v 9 ;  C D 4 4  v a r i a n t  9 ,  8 ・O H d G ; 8・h y d r o x y - 2 ' - d e o x y g u a n o s i n e ,O E ;  o v a r i a n  e n d o m e t r i o m a ,  C C C ;  c l e a r  \nc e l l  c a r c i n o m a .  \n\n箇\n。 。 寸 》 《 \n‘ ま \n。 。 守 \nX\nO O H X  \nu  \noodx \n\n, . . . . . . . , .  \n~ 0  \n' - - \" '  \n0  \n0  \n•  • •  , .  \nr l  \n•  \n•  •  \n0  \n0 0  \n•  \n'  •  •  •  I  \n• •  •  \n0  0 )  \n, .  •  \nl O  >  \n~ \n~ \nQ  \nu  \n0  \nt j \"  \n•  \n0  \nN  \n0  \n, , . - . . . .  0  0  0  \n' 3 - 0  0 0  I J )  \n\" ' - . _ /  M  \n0  \n9 P H 0 - 8  \n\nT a b l e  1  D e m o g r a p h i c  a n d  c l i n i c a l  c h a r a c t e r i s t i c s  o f  t h e  s t u d y  p o p u l a t i o n .  \nB a s e l i n e  c h a r a c t e r i s t i c s  o f  t w o  g r o u p s  \nT h e  O E  g r o u Q  T h e  C C C  g r o u p  P - v a l u e  \nN u m b e r  2 7  8  \nF I G O  s t a g e  I  ( n = 5 ) ,  I I  ( n = l ) ,  I I I  ( n = l ) ,  I V  ( n = l )  \nA g e  a t  d i a g n o s i s ,  \nm e a n 土 S D 4 0 . 6 土1 0 . 3 5 7 . 0 土1 0 . 1 0 . 0 0 1  \nm e d i a n  ( r a n g e )  4 2 ( 2 0  -6 8 )  5 5 . 5 ( 4 7 ・75 ) \nN u l l i p a r o u s  \nn  ( % )  1 5  ( 5 5 .6 % )  2  ( 2 5 .0 % )  0 . 1 1 2  \nP r e m e n o p a u s e  \nn  ( % )  2 1  ( 7 7 .8 % )  2  ( 2 5 .0 % )  0 . 0 1 1  \nA  m a x i m u m  d i a m e t e r  o f  t h e  c y s t  ( c m )  \nm e a n 土 S D 6 . 9 土 3 . 9 1 2 . 7 士 5 . 5 0 . 0 1 7  \nm e d i a n  ( r a n g e )  6 . 3  ( 1 . 2  2 1 . 0 )  1 3 . 0  ( 4 . 7  - 2 0 . 0 )  \nC A 1 2 5 ( U /m l )  \nm e a n 士 S D 1 1 2 . 4  ±  1 6 1 . 4  1 1 3 . 4 土 1 5 6 . 5 0 . 9 8 3  \nm e d i a n  { r a n g e  2  4 0  { 6  -5 7 7 2  3 6 . 0  ( 7  -4 6 5 )  \nT h e  p a t i e n t  a g e  ( p  =  0 . 0 0 1 ) ,  p r e m e n o p a u s a l  s t a t u s  ( p  =  0 . 0 1 1 )  a n d  a  m a x i m u m  d i a m e t e r  o f  t h e  c y s t 印 ＝ \n0 .  0 1 7 )  d i f f e r e d  s i g n i f i c a n t l y  b e t w e e n  p a t i e n t s  w i t h  E C  a n d  C C C .  \nF I G O ,  I n t e r n a t i o n a l  F e d e r a t i o n  o f  G y n e c o l o g y  a n d  O b s t e t r i c s ;  E C ,  e n d o m e t r i a l  c y s t ;  C C C ,  c l e a r  c e l l  \nc a r c i n o m a .  \nT a b l e  2  T h e  r e s u l t s  o f  C D 4 4 v 9  a n d  8・O H d G e x p r e s s i o n  i n  t w o  g r o u p s .  \nT h e  r e s u l t s  o f  C D 4 4 v 9  a n d  8・O H d G e x p r e s s i o n  T h e  O E  g r o u p  T h e  C C C  g r o u p  P - v a l u e  \nN u m b e r  2 7  8  \nT h e  p e r c e n t a g e  o f  C D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n  6 8 . 5 士 2 0 . 2 % 1 6 . 7 士 1 6 . 5 % く 0 . 0 0 1 \nC D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n  \nP o s i t i v e  2 4  2  0 . 0 0 1  \nN e g a t i v e  3  6  \nT h e  p e r c e n t a g 巴 o f 8・O H d G e x p r e s s i o n  7 7 . 3 土 2 2 . 5 % 9 4 . 9 土 3 . 0 % 0 . 0 4 9  \n8・O H d G e x p r e s s i o n  \nP o s i t i v e  2 6  8  0 . 7 7 1  \nN e g a t i v e  。\nC e l l  m e m b r a n e  C D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n  w a s  m a r k e d l y  d o w n r e g u l a t e d  i n  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s .  T h e  m e 姐\n（ 土 S D ) p e r c e n t a g e  o f  C D 4 4 v 9  p o s i t i v e  c e l l s  i n  C C C  e n d o m et r i o t i c  t i s s u e s  w a s  s i g n i f i c an t l y  l o w e r  t h a n  t h a t  \ni n  b e n i g n  E  C  ( 6 8 . 5 土 2 0 . 2 % v e r s u s  1 6 . 7 土 1 6 .5 % , p  <  0 . 0 0 1 ) .  \nC D 4 4 v 9 ,  C D 4 4  v a r i a n t  9 ;  8 - 0 H d G ,  8 - h y d r o x y - 2 ' - d e o x yg u a n o s i n e ;  C C C ,  c l e a r  c e l l  c a r c i n o m a ;  E  C  ,  \ne n d o m e t r i a l  c y s t .  \n\nT a b l e  3  T h e  r巴l a t i o n o f  C D 4 4 v 9  a n d  8 - 0 H d G  e x p r e s s i o n  i n  t h r e e  g r o u p s .  \nT h e  r e s u l t s  o f  C D 4 4 v 9  T h e  O E  g r o u p  T h e  C C C  p - va l u e  \na n d  8・O H d G e x p r e s s i o n  E n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s  T u m o r  t i s s u e s  \nN u m b e r  2 7  8  8  \nT h e  p e r c e n ta g e  o f  C D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n  6 8 . 5 土 2 0 . 2 % 1 6 . 7 土 1 6 . 5 % 5 6 . 9  ±  3 2 . 8 %  く0 . 0 0 1 \nC D 4 4 v 9  e x p r 巴s s i o n \nP o s it i v e  2 4  2  6  \nN e g a t i v e  3  6  2  \nT h e  p e r c e n t a g e  o f  8・O H d G e x p r e s s i o n  7 7 . 3 土 2 2 .5 % 9 4 . 9 土 3 . 0 % 8 8 . 9 土 1 4 .6 % 0 . 1 0 3  \n8・O H d G 巴x p r e s s i o n \nP o s it i v e  2 6  8  8  \nN e g a t i v e  。 。\nR e m a r k a b l e  di f f e r e n c e  i n  C D 4 4 v 9  e x p r e s s i o n  w a s  o b s e r v e d  a m o n g  O E  g r o u p s ,  C C C  e n d o m e t r i o t i c  t i s s u e s  \na n d  C C C 加m o r t i s s u e s .  T h e s e  d a t a  a r e  s h o w n  i n  m e a n  （ 土 S D ) .\nC D 4 4 v 9 ,  C D 4 4  v a r i a n t  9 ;  8 - 0 H d G ,  8・hy d r o x y - 2 ' -d e o x y g u a n o s i n e ; C C C ,  c l e a r  c e l l  c a r c i n o m a ;  E C ,  \ne n d o m e t r i a l  c y s t .","source_license":"CC0","license_restricted":false}