Morphofunctional characteristics of neuroendocrine cells in genital endometriosis

to study the neuroendocrine component of neuroimmunogenic inflammation in genital endometriosis.

in the clinical study, fragments of endometrioid cysts and endometrial biopsy specimens were analyzed in women with genital endometriosis in two groups: I group – without pain syndrome; II group – with pain syndrome.

light microscopy, immunohistochemistry, PCR-RT. Results: The number of neuroendocrine cells (increased NSE expression) was higher in the II group in patients with pain syndrome by almost 2 times (28.7±3.1 %) compared to group I without pain syndrome (15.6±2.4 %). Expression of S100: Group I – 0.11±0.09, Group II – 0.36±0.11. Expression of PGP 9.5: Group I – 0.8±0.21; Group II – 1.26±0.01. Expression of TAC1, TRPV1, SCN9A, SCN11A in endometrioid cyst samples was significantly higher than the threshold level (p<0.05). Expression of TRPA1 and P2RX3 differed insignificantly compared with the control. Conclusion: an increase in the number of neuroendocrine cells in the focus of neuroimmunogenic inflammation in endometrioid ovarian cysts is one of the key triggers in the pathogenesis of endometriosis-associated pelvic pain. NSE should be considered as a promising marker of genital endometriosis. Key words: genital endometriosis, NSE, S100, PGP 9.5, chronic pelvic pain 446446 original research morphology Оригинальные исследОвания Морфология Э ндометриоз – хроническое, доброкаче- ственное, эстроген-зависимое, мультифак- ториальное гинекологическое заболевание, при котором за пределами матки происходит разрастание элементов дифферонов эндоме- трия, в частности клеток железистого эпителия, образующего маточные железы, и соответствую- щих клеток стромы [1, 3, 4, 11, 18]. Эндометриоз обнаруживают у 10–15 % женщин репродуктив- ного возраста с пиком в интервале от 25 до 35 лет [2, 3, 11, 18]. В зависимости от локализации различают ге - нитальный (внутренний и наружный) и экстраге - нитальный типы эндометриоза [1, 4]. Первый тип характеризуется наличием очагов поражения в пределах половых органов, в частности в яичниках с образованием эндометриоидных кист – наиболее часто встречающаяся форма генитального эндо - метриоза, также называемая «шоколадная киста» [1, 3, 4]. При этом самым распространенным и в то же время специфическим симптомом является эн - дометриоз-ассоциированная хроническая тазовая боль (ХТБ), патогенез которой, как и механизм раз - вития овариального эндометриоза в целом, остает- ся неясным и требует дальнейшего изучения. При этом одним из ключевых механизмов развития ХТБ являются регенерация и миелинизация нервных во - локон в очаге эндометриоидного поражения [6, 10, 11, 16] со специфическими провоспалительными изменениями [9, 15]. Несмотря на то что достоверно установлена вза- имосвязь между плотностью нервных волокон и ней- рогенным воспалением, остаются малоизученными специфические регуляторы активации роста этих во- локон в зоне эндометриоидного поражения при дей- ствии воспалительных факторов [9, 13]. Детальное изучение типовых процессов иннер- вации в местах эндометриоидных очагов стало воз- можным с применением некоторых специфиче- ских функциональных маркеров. Белок Protein Gene Product 9.5 (PGP 9.5) является высокоспецифичным пан-нейрональным маркером. Так, обнаружение это- го белка указывает на наличие миелиновых и безми- елиновых нервных волокон [16]. Выявление группы кальций-связывающих белков S100 нейроэктодер- мальной природы необходимо для верификации от- дельных миелиновых волокон, в том числе леммоци- тов [9, 13]. Рост нервных волокон напрямую связан с изме- нением экспрессии ключевых генов, ответственных за ноцицептивную чувствительность [12]. К таким продуктам экспрессии относятся катионные кана- лы с транзиторным рецепторным потенциалом (TRP channels), в частности TRPA1 (анкириновые) и TRPV1 (ванилоидные). Эти каналы необходимы для форми- рования гиперчувствительности к тепловым и меха- ническим раздражителям в условиях хронического воспаления. Выявленное повышение уровня имму- нореактивности TRPV1 в эндометриоидных очагах сопровождается синдромом ХТБ [7]. Другие гены, ко- дирующие потенциал-зависимые натриевые каналы SCN9A, SCN11A, также влияют на ноцицепцию, обе- спечивая более активный ответ на раздражитель при ряде болевых состояний воспалительного характера [12]. Считается, что развитие механической гиперал- гезии путем метаботропного ответа на выделяющий- ся из окружающих клеток АТФ в условиях воспаления связано с семейством потенциал-зависимых пури- нергических рецепторов P2X [17]. Не менее важным геном-регулятором ноцицепции является ТAC1, кото- рый кодирует субстанцию P и осуществляет переда- чу болевого сигнала в центральной нервной системе (ЦНС) [12]. Несмотря на наличие множества белков-участ- ников ХТБ, остается малоизученной роль нейроэн- докринного компонента. Существует предположе- ние, что выделяемые нейроэндокринными клетками биогенные амины и пептидные гормоны участвуют в патогенезе ХТБ. Для обнаружения нейроэндокрино- цитов используют специфический маркер – нейрон- специфическая енолаза (NSE) [20]. Цель исследования: изучение нейроэндокринного компонента воспаления при генитальном эндометри- озе, сопровождаемого болевым синдромом. Материал и методы. Выборочную совокупность составили женщины в возрасте 35±5 лет (n=42). Кри- терием включения в исследование было наличие эн- дометриоидной кисты яичника. Пациентки были ран- домизированы на 2 группы. Первая группа включила 11 человек с бесплодием и наружным генитальным эндометриозом (НГЭ) без тазовой боли. Вторая груп- па – 31 пациентку с наружным генитальным эндоме- триозом, выраженным тазовым болевым синдромом, не получавших предварительно гормональной тера- пии. Всем пациенткам было выполнено оперативное лечение в объеме лапароскопической цистэктомии и/или резекции яичника, а также аспирационная би- опсия эндометрия. Материалом для исследования были капсула эндометриоидной кисты, прилежащие к ней ткани яичника и аспират эндометрия. Исследова- ние проводилось методами световой микроскопии, иммуногистохимии и ПЦР-диагностики. Морфологическое исследование. Для гистоло- гического исследования фрагментов стенок эндо- метриоидных кист использовали стандартный метод (фиксация формалином, заливка в парафин, окраска гематоксилином и эозином). ИГХ-исследование проводили по стандартному протоколу в автоматическом режиме в иммуногисто- стейнере Bond-Max («Leica», Германия). Первичные антитела (в готовом к использованию разведении), их классы Ig и клоны приведены в таблице. Вторичные антитела (антимышиные) – кроличьи Cell Marque. Для каждого маркёра выполнялись контрольные исследо- вания с целью исключения псевдопозитивных и псев- донегативных результатов. Ядра клеток докрашивали гематоксилином Mayer. Интенсивность окрашивания срезов оценивали согласно рекомендациям [4, 8] (ve): «–» – отсутствие экспрессии; «+» – слабая экс- прессия (1–10 % клеток); «++» – умеренная экспрес- сия (11–50 % клеток); «+++» – выраженная экспрессия (высокоинтенсивная иммунопероксидазная реакция, ≥51 % клеток). Полимеразная цепная реакция в режиме реаль- ного времени (ПЦР-РВ). Исследование фрагментов эндометриоидных кист и биоптатов эндометрия про- водили согласно стандартному протоколу (стаби- лизация, гомогенизация, экстракция РНК, синтез и выделение кДНК). Нормирование выполнено относи- тельно референсных генов домашнего хозяйства 18S, B2M, GAPDH. Гены и последовательность праймеров: TRPA1, forward, 5′-tggacaccttcttcttgcatt-3′, reverse, 5 ′-tcatccatttcatgcagcac-3′ ; TRPV1, forward, 5′ -agagtcacg- ctggcaacc-3′, reverse, 5′-ggcagagactctccatcacac-3′; SCN9A, forward, 5′-caacttttaagggatggacga-3′, reverse, МЕДИЦИНСКИЙ ВЕСТНИК СЕВЕРНОГО КАВКАЗА 2017. Т. 12. № 4 Medical news of north caucasus 2017. Vоl. 12. Iss. 4 447447 Таблица Иммуногистохимическая реакция (используемые антитела) Антитела (фирменное название) Клон, Ig класс, фирма, разведение Специфичность и характеристика БЕЛКИ КОМПОНЕНТОВ НЕРВНОЙ ТКАНИ Mouse Monoclonal Antibody Neurospecific Enolase (NSE) Clone MRQ-55, IgG2b Cell Marque Цитоплазматический маркер. В норме: тело нейро- на, нейроэндокринные клетки Mouse Monoclonal Antibody S100 Protein Clone EP186, IgG1 Bio SB Цитоплазматический маркер. В норме: клетки, про- изводные ганглиозной пластинки (шванновские клетки, меланоциты и т. д.) Mouse Monoclonal Antibody Protein Gene Product 9.5 (PGP 9.5) Clone BSB-46, Ig2b Bio SB Цитоплазматический маркер. В норме: нейроны, ми- елиновые и безмиелиновые нервные волокна ЦНС и ПНС ФАКТОРЫ ВОСПАЛЕНИЯ Mouse Monoclonal Antibody CD10 Clone 56C6, IgG1 Novocastra TM Трансмембранный маркер. В норме: предшествен - ники В-лимфоцитов; миоэпителиоциты протоков мо- лочных желез и желчных канальцев, микроворсинки эпителия проксимального отдела нефрона Mouse Monoclonal Antibody IL-1β Clone E7-2-hIL1β, IgG2b Santa Cruz Biotechnology, Inc Цитоплазматический маркер. Продуцируется акти- вированными макрофагами. Провоспалительный цитокин способствует активации лимфоцитов и их делению РЕЦЕПТОРЫ ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ ГОРМОНОВ Mouse Monoclonal Antibody Estrogen receptor (ER) Clone 6F11, IgG1 Novocastra TM Ядерный маркер. В норме: клетки эндометрия, яич- ника и миометрия, а также клетки протоков мо- лочных желез. Клетки-мишени: матка, влагалище, мочеиспускательный канал, молочные железы, пе- чень, гипоталамус, гипофиз Mouse Monoclonal Antibody Progesterone receptor (PRG) Clone 16, SAN27, IgG1 Novocastra TM Ядерный маркер. В норме: клетки эндометрия, яич- ника и миометрия, а также клетки протоков мо- лочных желез. Клетки-мишени: матка, влагалище, мочеиспускательный канал, молочные железы, пе- чень, гипоталамус, гипофиз Примечание. ПНС – периферическая нервная система. Результаты. Микроскопическое описание эн - дометриоидных кист яичников I и II групп. Кисты вы - стланы кубическим эпителием с единичными рес - нитчатыми клетками; имеются частицы сплющенных эндометриоидных желез, а также отложения гема - тина и гемосидерина (локальный экстравазальный гемосидероз). Индекс васкуляризации высокий (рис. 1). Данные иммуногистохимического исследования. В группе пациенток с болевым синдромом отмечает- ся стабильно высокая («ve+/3») положительная реак- ция на антитела к NSE в эпителиальной выстилке эн- дометриоидных желез, а также в нейроэндокринных клетках, которые лежат маленькими группами, со- провождая аденоматозный компонент и кровеносные сосуды. Мелкодисперсные гранулы визуализируются в нейроэндокринных клетках, образующих островки в интерстициальной ткани («ve+/2»). Средний уровень цитоплазматической иммунной реакции с антите- лами на NSE присутствует в эпителии эндометрио- идных желез и нейроэндокринных клеток в группе с безболевым синдромом (рис. 1) . S100 в биоптатах II группы демонстрирует положительную реакцию в леммоцитах миелиновых нервных волокон («ve+/3»), тогда как в леммоцитах и мантийных клетках нервных волокон I группы уровень иммунной реакции снижен («ve+/2»). Следует отметить разницу в плотности за- нимаемого волокнами ареала (в разных полях зрения при одинаковом увеличении микроскопа), а также в толщине нервных волокон: у пациенток II группы в эндометриоидных кистах эти показатели в два раза выше по сравнению с аналогичными показателя- ми у пациенток I группы. На увеличение плотности на единицу площади, занимаемой миелиновыми и 5′-tcatatttgggctgcttgtct-3′; SCN11A, forward, 5′-acctgag- cctgaacaacagg-3′, reverse, 5′-tttgaactctctggctcgtg-3′; P2RX3, forward, 5′-ggcctttacttctgtgggagt-3′, reverse, 5′-aaacttcttggctttgtactggtc-3′; TAC1, forward, 5′-gcctcag- cagttctttggat-3′, reverse, 5′-agcctttaacagggccactt-3′. Полученные результаты статистически обрабаты- вали с использованием программного пакета SPSS 7.5 for Windows (IBM Analytics, США). Рассчитывали среднеарифметические и среднеквадратичные от- клонения. Количественные данные, полученные в ходе ПЦР-РВ, были проанализированы с использова- нием рангового дисперсионного анализа ANOVA. Для сравнения двух выборок использовали t-критерий с уровнем значимости p<0,05. 448448 original research morphology Оригинальные исследОвания Морфология Окрас- ка ГРУППЫ Аспират из полости матки (контроль)I (Безболевой синдром) II (Болевой синдром) гематоксилин-эозин ×20 ×20 ×20 NSE ×20 ×40 ×20 S100 ×20 ×20 ×40 PGP 9.5 ×20 ×40 ×20 CD10 ×20 ×20 ×20 Рис. 1. Эндометриоидные кисты яичников (n=42). Окраска: гематоксилин и эозин; иммуногистохимические реакции с антителами к NSE, S100, PGP 9.5 и CD10, докрашивание – гематоксилином МЕДИЦИНСКИЙ ВЕСТНИК СЕВЕРНОГО КАВКАЗА 2017. Т. 12. № 4 Medical news of north caucasus 2017. Vоl. 12. Iss. 4 449449 безмиелиновыми волокнами, также указывает пан- нейрональный маркер PGP 9.5. Тем не менее имму- номечение в исследуемых группах определяется как «ve+/3». Положительная реакция на СD10 в обеих группах («ve+/3») доказывает эндометриоидную при- роду происхождения кист яичника, а также указывает на миграции лимфоидных элементов в очаг локаль- ного воспаления. Провоспалительный цитокин IL-1β демонстрирует высокую реакцию в эпителии эндоме- триоидных кист у пациенток II группы по сравнению с I группой. Эндокринная функция в обеих группах в пределах возрастной физиологической нормы, что подтверждается положительной нуклеарной реакци- ей с антителами к рецепторам эстрогенов и проге- стеронов («ve+/3»). Статистические данные позволяют утверждать, что количество нейроэндокринных клеток с положи- тельной реакцией с антителами к NSE выше у пациен- ток с болевым синдромом почти в 2 раза (28,7±3,1 %) по сравнению с I группой (15,6±2,4 %). Анализ уров- ня экспрессии S100 в миелиновых нервных волокнах (леммоцитах) и их плотности (волокна/мм 2 ) в выбо- рочной совокупности указывает на неоднородность по данному признаку (p<0,05) в исследуемых груп- пах: I группа – 0,11±0,09; II группа – 0,36±0,11. При этом общая плотность миелиновых и безмиелиновых нервных волокон (ИГХ-реакция с PGP 9,5) в груп- пах имеет следующие значения: I группа – 0,8±0,21; II группа – 1,26±0,01. Анализ экспрессии генов посредством ПЦР-РВ. В ходе оценки уровня экспрессии генов ноципетивных ионных каналов и TAC1 с помощью измерения коли - чества мРНК соответствующих генов во фрагментах эндометриоидных кист и эутопического (контроль) эндометрия были выявлены существенные статисти - ческие различия между исследуемыми образцами. Экспрессия TAC1, TRPV1, SCN9A, SCN11A в образцах эндометриоидной кисты значительно и достоверно превышала пороговый уровень контроля (р<0,05). В это же время экспрессия TRPA1 и P2RX3 отличалась незначитель - но по сравнению с контролем. Обсуждение. Результаты данного исследования позволили определить новую патогенети - ческую концепцию формирова - ния тазового болевого синдрома у женщин с НГЭ (с эндометри - оидными кистами яичников). Учитывая тот факт, что нейро - эндокринные клетки являются многофункциональными медиа - торами, регулирующими функци - ональную активность различных органов [4, 5, 13, 19], локальное увеличение количества нейроэн - докриноцитов в участке эндоме - триоидного поражения (высокий уровень экспрессии NSE) при ХТБ способствует секреции боль - шего количества биологически активных веществ, в том числе различных провоспалительных медиаторов, нейтрофинов, нейропептидов и др. [2, 5]. Опосредованно, через активные хемоаттрактан - ты нейроэндокринные клетки способствуют повы - шению миграции макрофагов и других элементов воспаления. Наряду с этим происходит стимуляция роста и ветвления нервных волокон. Тем самым уси - ливается нейроиммуногенное воспаление в очаге эндометриоидного поражения с развитием гипер - чувствительности и гипералгезии, что в итоге при- водит к появлению болевого синдрома. Таким обра - зом, нейроэндокринные клетки являются одним из триггеров в патогенезе ХТБ при эндометриоидных кистах яичника. Обнаруженные PGP 9.5- и S100-ИГХ-позитивные нервные волокна в интерстициальной ткани яичника с эндометриоидным поражением свидетельствуют о выраженном разрастании миелиновых и безми - елиновых нервных волокон у женщин, страдающих эндометриозом, и их способности иннервировать не только здоровые ткани яичника, но и ткани эндоме - триоидной кисты [9, 10]. Результаты статистического анализа также показывают высокую степень корре - ляции между плотностью выявленных нервных воло- кон и присутствием болевого синдрома у женщин с эндометриоидными кистами яичников. В эпителии эктопического эндометрия наблюдается стабильно высокий уровень провоспалительного цитокина IL-1β и CD10 с присутствием прогестероновых и эстроге - новых рецепторов в клетках покровного эпителия и маточных желез, что свидетельствует о нейрогенном воспалении в очагах поражения. На основании проведенного ретроспективно - го исследования можно утверждать, что выражен - ный рост нервных волокон в очагах эндометриоза у женщин, страдающих ХТБ, зависит от активности цитокинов и факторов роста, обусловливающих ло - кальное воспаление на фоне гормонального статуса пациенток. Так, на основании проведенного анализа (ПЦР- РВ) экспрессии генов [19], ответственных за ноци- цепцию и проведение сигнала в ЦНС, можно считать, что патогенез ХТБ связан с развитием гиперчувстви- тельности и гипералгезии на фоне развившегося нейроиммуногенного воспаления (рис. 2). Заключение. Увеличение количества нейроэн- докринных клеток в очаге нейроиммунного воспале- ния при эндометриоидных кистах яичника является одним из ключевых триггеров в патогенезе эндомет- риоз-ассоциированных тазовых болей. Рис. 2. Роль нейроэндокринных клеток в патогенезе хронических тазовых болей при наружном генитальном эндометриозе 450450 original research morphology Оригинальные исследОвания Морфология Литература 1. Адамян, Л. В. Генитальный эндометриоз. Современ- ный взгляд на проблему / Л. В. Адамян, С. А. Гаспа- рян. – Ставрополь, 2004. – С. 228. 2. Боровая, Т. Г. Источники и возрастные особенности эндометриоидных кист / Т. Г. Боровая // Морфоло- гия. – 2016. – № 3. – С. 41. 3. Демяшкин, Г. А. Иммуногистохимическая характе- ристика эндометриоза стенки кишки / Г. А. Демяш- кин, И. М. Терлоев, М. Н. Касанова, Я. С. Борисов // Крымский журнал экспериментальной и клинической медицины. – 2017. – № 7 (4). – С. 40–45. 4. Борисова, А. В. Сравнительный анализ липидного состава перитонеальной жидкости и плазмы крови у пациенток с наружным генитальным эндометрио- зом и миомой матки / А. В. Борисова, В. В. Чаговец, А. В. Козаченко [и др.] // Акушерство и гинеколо- гия. – 2017. – № 6 – С. 74–82. 5. Телегина, И. В. Особенности репарации раны на матке после операции кесарева сечения / И. В. Теле- гина, И. Г. Нежданов, Р. В. Павлов [и др.] // Меди- цинский вестник Северного Кавказа. – 2013. – Т. 8, № 2. – С. 89–92. 6. Arnold, J. Neuroimmunomodulatory alterations in non- lesional peritoneum close to peritoneal endometriosis / J. Arnold, G. F. Vercellino, V. Chiantera [et al.] // Neuroimmunomodulation. – 2013. – 20(1). – P. 9–18. 7. Basbaum, A. I. Cellular and Molecular Mechanisms of Pain / A. I. Basbaum, D. M. Bautista, G. Scherrer, D. Julius // Cell. – 2009. – Vol. 139. – P. 267–284. 8. Dabbs, D. J. Diagnostic immunohistochemistry. Forth edition / D. J. Dabbs. – Philadelphia, PA: Elsevier/ Saunders, 2014. – 960 р. 9. Donato, R. Functions of S100 Proteins / R. Donato, B. Cannon, G. Sorci, F. Riuzzi [et al.] // Curr. Mol. Med. – 2012. – Vol. 13. – P. 24–57. 10. Greaves, E. Elevated peritoneal expression and estrogen regulation of nociceptive ion channels in endometriosis / E. Greaves, K. Grieve, A. W. Horne, P. T. Saunders // J. Clin. Endocrinol. Metab. – 2014. – Vol. 99. – P. E1738– 1743. 11. Joseph, E. K. Vascular Endothelial Cells Mediate Mechanical Stimulation-Induced Enhancement of Endothelin Hyperalgesia via Activation of P2X2/3 Receptors on Nociceptors / E. K. Joseph, P. G. Green, O. Bogen [et al.] // J. Neurosc. – 2013. – Vol. 33. – P. 2849–2859. 12. Markham, S. M. Extrapelvic endometriosis / S. M. Mark- ham, S. E. Carpenter, J. A. Rock // Obstet. Gynecol. Clin. North Am. – 1989. – Vol. 16. – P. 193–219. 13. Miller, E. J. The importance of pelvic nerve fibers in endometriosis / E. J. Miller, I. S. Fraser // Women’s health. – 2015. – Vol. 11, № 5. – P. 611–618. 14. Missmer, S. A. The epidemiology of endometriosis / S. A. Missmer, D. W. Cramer // Obstet. Gynecol. Clin. North Am. – 2003. – Vol. 30. – P. 1–19. 15. Morotti, M. Peripheral changes in endometriosis- associated pain / M. Morotti, K. Vincent, J. Brawn [et al.] // Hum. Reprod. Update. – 2014. – Vol. 20. – P. 717–736. 16. Poli-Neto, O. B. Increased capsaicin receptor TRPV1 in the peritoneum of women with chronic pelvic pain / O. B. Poli-Neto, A. A. Filho, J. C. Rosa e Silva [et al.] // Clin. J. Pain. – 2009. – Vol. 25. – P. 218–222. 17. Tokushige, N. Nerve fibers in ovarian endometriomas / N. Tokushige, R. Markham, P. Russell, I. S. Fraser // Fertil Steril. – 2010. – Vol. 94 (5). – P. 1944–1947. 18. Vercellini, P. Endometriosis: pathogenesis and treatment / P. Vercellini, P. Vigan ò, E. Somigliana, L. Fedele // Nature Rev. Endocrinol. – 2014. – Vol. 10 (5). – P. 261–275. 19. Vigan ò, P. Endometriosis: epidemiology and aetiological factors / P. Vigan ò, F. Parazzini, E. Somigliana, P. Vercellini // Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. – 2004. – Vol. 18. – P. 177–200. 20. Wang, G. Neuroendocrine cells in eutopic endometrium of women with endometriosis / G. Wang, N. Tokushige, P. Russell [et al.] // Hum. Reprod. – 2010. – Vol. 25. – P. 287–291. 21. Zhang, X. Nerve fibres in ovarian endometriotic lesions in women with ovarian endometriosis / X. Zhang, H. Yao, X. Huang [et al.] // Hum. Reprod. – 2010. – Vol. 25. – P. 392–397.

1. Adamyan L. V., Genital endometriosis. A modern view of the problem. Stavropol. 2006. 2. Borovaya T. G. Morfologiya. – Morphology. 2016;3:41. 3. Demyashkin G. A., Terloyev I. M., Kasanova M. N., Bori- sov I. S. Krymskij zhurnal jeksperimental’noj i klinicheskoj mediciny. – Crimean Journal of Experimental and Clinical Medicine. 2017;7(4):40-45. 4. Borisova A. V., Chagovets V. V., Kozachenko A. V., Starodubtseva N. L., Kononikhin A. S., Salimova D. F., Kogan E. A., Adamyan L. V., Frankevich V. E., Suk- hikh G. T. Akusherstvo i ginekologiya. – Obstetrics and gynecology. 2017;6:74-82. 5. Telegina I., Nezhdanov I., Pavlov R., Aksenenko V., Demyashkin G. Meditsinskii vestnik Severnogo Kavkaza. – Medical News of the North Caucasus. 2013;8(2):89-92. 6. Arnold J., Arnold J., Vercellino G. F., Chiantera V., Schneider A., Mechsner S. Neuroimmunomodulation. 2013;20(1):9-18. 7. Basbaum A. I., Bautista D. M., Scherrer G., Julius D. Cell. 2009;139:267-284. 8. Dabbs D. J. Diagnostic immunohistochemistry. Forth edition. Philadelphia, PA: Elsevier/Saunders. 2014. 9. Donato R., Cannon B., Sorci G., Riuzzi F., Hsu K., We- ber D., Geczy C. Curr. Mol. Med. 2012;13:24-57. 10. Greaves E., Grieve K., Horne A. W., Saunders P. T. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2014;99:E1738-1743. 11. Joseph E. K., Green P. G., Bogen O., Alvarez P., Levi- ne J. D. J. Neuroscience. 2013;33:2849-2859. 12. Markham S. M., Carpenter S. E., Rock J. A. Obstet. Gynecol. Clin. North Am. 1989;16:193-219. 13. Miller E. J., Fraser I. S. Women’s health. 2015;11(5):611- 618. 14. Missmer S. A., Cramer D. W. Obstet. Gynecol. Clin. North Am. 2003;30:1-19. 15. Morotti M., Vincent K., Brawn J., Zondervan K. T., Bec- ker C. M. Hum. Reprod. Update. 2014;20:717-736. 16. Poli-Neto O. B., Filho A. A., Rosa e Silva J. C., Barbo- sa H. F., Candido Dos Reis F. J., Nogueira A. A. Clin. J. Pain. 2009;25:218-222. 17. Tokushige N., Markham R., Russell P., Fraser I. S. Fertil Steril. 2010; 94(5):1944-1947. 18. Vercellini P., Vigan ò P., Somigliana E., Fedele L. Nature Rev. Endocrinol. 2014;10(5):261-275. 19. Vigan ò P., Parazzini F., Somigliana E., Vercellini P. Best. Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. 2004;18:177-200. 20. Wang G., Tokushige N., Russell P., Dubinovsky S., Markham R., Fraser I. S. Hum. Reprod. 2010;25:287- 291. 21. Zhang X., Yao H., Huang X., Lu B., Xu H., Zhou C. Hum. Reprod. 2010;25:392-397. Сведения об авторах: Демяшкин Григорий Александрович, врач-патологоанатом, старший преподаватель кафедры патологической анатомии; тел.: 89262755302; е-mail: [email protected] Оразов Мекан Рахимбердыевич, доктор медицинских наук, профессор кафедры акушерства и гинекологии с курсом перинатологии; тел.: 89152375292; е-mail: [email protected] Закирова Яна Рявхатевна, аспирант кафедры акушерства и гинекологии с курсом перинатологии; тел.: 89060931028; е-mail: [email protected] Жарков Николай Владимирович, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник; тел.: 89653368683; е-mail: [email protected] Батов Максим Александрович, студент 6 курса; тел.: 89261024871; е-mail: [email protected] Борисов Ярослав Сергеевич, студент 6 курса; тел.: 89175500946; е-mail: [email protected]