Evaluación del papel terapéutico de la inhibición del PAI en el tratamiento de la endometriosis en un modelo animal murino homólogo

Evaluacion del papel terapeutico de la inhibicion del PAI (inhibidor del activador del plasminogeno) en el tratamiento de la endometriosis en un modelo animal murino homologo. HIPOTESIS: La Inhibicion del PAI-1 (inhibidor del activador del plasminogeno), y por tanto, la potenciacion de la fibrinolisis endogena tendria un papel beneficioso sobre la endometriosis una vez bien establecidas las lesiones, cursando con disminucion de las mismas, potencialmente mediado por inhibicion de la angiogenesis, proliferacion celular y un aumento de la apoptosis. OBJETIVOS PRIMARIOS Y SECUNDARIOS: Evaluacion en un modelo animal murino homologo del papel terapeutico de la inhibicion del PAI-1 en el tratamiento de la endometriosis mediante determinacion de su efecto sobre el tamano de las lesiones. Evaluar si las acciones de inhibicion del PAI-1 cursan con: afectacion de la fibrinolisis, la matriz extracelular, la angiogenesis, la proliferacion celular, la apoptosis y el reclutamiento de celulas inmunes. METODOLOGIA: Para llevar a cabo dicho proyecto se implanto en tejido subcutaneo de ratones hembra (n=9) inmunocompetentes 1 fragmento de tejido endometrial obtenido de ratones hembra de la misma cepa previamente marcado con proteina fluorescente m-cherry. Durante 2 semanas se les administro a los animales triplaxtinin (o PAI-039) como compuesto inhibidor de PAI-1 o placebo y se monitorizo de manera no invasiva el tamano de los fragmentos a partir de la cuantificacion de la fluorescencia emitida por la proteina de marcaje. La monitorizacion de la senal se llevo a cabo mediante un aparato Carestream acoplado a un aparato de anestesia inhalatoria. La cuantificacion de la senal se determino mediante software de J image asociado al Carestream. Al finalizar la monitorizacion se procedio al sacrificio de los animales y obtencion de las lesiones endometriosicas. Se realizo un analisis inmunohistoquimico-histologico de las lesiones: se sometieron a inmunohistoquimica a fin de identificar marcadores especificos de vascularizacion (?-SMA, isolectina B4), proliferacion (Ki-67), glandulas (citoqueratina), fibrina, m-Cherry, leucocitos (CD45) y macrofagos (F4/80); a tincion tricromica para determinacion del colageno (KN) y a la tecnica del TUNEL para determinar la apoptosis. Las senales obtenidas fueron cuantificadas objetivamente mediante software de analisis de imagen especifico (Image proplus) utilizando macros previamente utilizadas por nuestro grupo (Gomez y cols 2011). La existencia de diferencias significativas entre los dos grupos fueron evaluadas estadisticamente mediante tests parametricos o no parametricos atendiendo a la distribucion homogenea o no de los datos obtenidos. RESULTADOS: El tratamiento con PAI-039 demostro una reduccion significativa en el tamano de las lesiones endometriosicas sin llegar a eliminarlas por completo a la dosis testada.Respecto al analisis inmunohistoquimico-histologico se realizo una caracterizacion las lesiones endometriosicas obtenidas para compararlas con las lesiones humanas observandose una similitud en cuanto al numero de glandulas, depositos de colageno e inflamacion local. A su vez se realizo una cuantificacion de la fibrinolisis, la vascularizacion, la proliferacion y la apoptosis obteniendose una disminucion de las tres primeras en el grupo tratado con PAI-039 vs el control; sin embargo no fuimos capaces de detectar diferencias en cuanto a la apoptosis debido a la escasa cantidad de celulas apoptoticas detectadas en ambos grupos. CONCLUSIONES: La obtencion, marcaje fluorescente y posterior implantacion de tejido pseudomenstrual en ratones permite el desarrollo fiel de la endometriosis asi como la monitorizacion no invasiva del desarrollo de la enfermedad en un modelo inmunocompetente. La inhibicion del PAI-1 en dicho modelo disminuye el tamano de la lesion endometriosica una vez esta se encuentra bien establecida, pero no la elimina completamente, cursando a nivel histologico con descenso de los depositos de fibrina, vascularizacion y proliferacion celular. Si estudios posteriores, con evaluacion del tamano de la lesion a mas largo plazo confirman nuestros hallazgos, el uso de inhibidores del PAI-1 podria incorporarse como arma terapeutica de uso clinico para tratar la endometriosis en un futuro.