PADRONIZAÇÃO DO ISOLAMENTO DE NEUTRÓfiLOS DE BAIXA DENSIDADE (LDNS) EM SANGUE PERIFÉRICO HUMANO

Os neutrófilos de baixa densidade (LDNs) são uma subpopulação de neutrófilos ligados a investigação de processo inflamatórios, porém sua extração eficiente ainda presenta um desafio técnico, dada a ausência de padronização nas metodologias descritas na literatura. Descrever a adaptação e padronização da técnica de separação de LDNs em sangue periférico humano, utilizando gradiente de densidade, para garantir isolamento e viabilidade na aplicação de estudos clínicos laboratoriais. Foram coletadas amostras de sangue de 40 pacientes divididos entre grupo controle e grupo com endometriose, conforme critérios de inclusão previamente estabelecidos. A técnica baseou-se no protocolo de Sagiv et. al. (2016), com adaptação do tempo de centrifugação. Utilizou-se gradiente de densidade com Ficoll Paque Plus em tubos falcon de 15ml, seguindo de centrifugação a 500 x g a 45 minutos, a posterior isolamento da camada de células mononucleares (PBMCs) contendo os LDNs. A contagem celular foi realizada em câmara de Neubauer em liquido de turk para evidenciar os leucócitos, uma diluição 1:20. Adaptação do tempo de centrifugação de 30 para 45 minutos permitiu a obtenção de separações mais nítidas e eficazes das camadas celulares. A contagem em câmara de Neubauer foi viável e reprodutível em todas as amostras. A padronização possibilitou analises quantitativas preliminares dos LDNs com sucesso técnico. O protocolo adaptado mostrou-se eficaz na separação e contagem dos LDNs em contexto laboratorial de pesquisa. A técnica padronizada representa um passo essencial para continuidade de estudos envolvendo essa subpopulação de neutrófilos. A metodologia aqui apresentada permitiu a padronização do isolamento e contagem de LDNs com eficácia. Os resultados obtidos contribuem significativamente para estudos futuros e reforçam o potencial dos LDNs como biomarcadores em doenças inflamatórias.