Avaliação da expressão de fatores de transcrição e microRNA como Loops corregulatórios em lesões de endometriose pélvica e sua correlação com intensidade de doença e com a fibrose

Introdução: A endometriose é considerada uma doença benigna, mas com mecanismos de invasão e disseminação similares ao das neoplasias. Acredita-se que o controle da expressão do sistema biológico seja realizado via miRNA incluindo a função dos fatores de transcrição, intimamente associados com a fisiopatologia de algumas doenças, incluindo a endometriose. Objetivo: Avaliar o perfil de expressão de Loops co-regulatórios - fatores de transcrição e microRNA em lesões de endometriose profunda utilizando ferramentas moleculares. Foram analisadas amostras de lesão de pacientes portadoras de endometriose profunda (grupo caso) e amostras de endométrio de pacientes sem endometriose (grupo controle). Casuística, Material e Métodos: Foram analisadas 20 amostras de lesão de pacientes portadoras de endometriose profunda (grupo caso), e 14 amostras de endométrio de pacientes sem endometriose (grupo controle). As amostras foram obtidas por cirurgia laparoscópica, fixadas e processadas em blocos FFPE. A fibrose foi avaliada por coloração histoquímica. As áreas de interesse foram identificadas microscopicamente, em lâminas coradas com hematoxilina-eosina, seguidas de microdissecção manual e extração de RNA total. Para a análise dos fatores de transcrição e expressão de miRNAa, realizou-se síntese de cDNA e qPCR utilizando produtos comerciais. Os resultados da RT-qPCR foram analisados utilizando bioinformática GeneGlobe Data Analysis Center (Qiagen) e RStudio versão 4.4.2 e alvos dos miRNAs diferentemente expressos foram preditos utilizando redes de interação molecular software IPA (Qiagen) e as figuras geradas com Cytoscape versão 3.10.3. Resultados: Na análise de fatores de transcrição, observou-se redução significativa da expressão de SMAD9 (Fold Regulation = -2,5) e GATA2 (Fold Regulation= -7,1), enquanto NR3C1 discreto aumento de expressão, mas sem significância estatística. Foram identificados 15 miRNas, sendo miR-1-3p, miR-133a-3p e miR-133b, todos com forte elevação de expressão (p < 0.013; p < 0.012; p < 0.007, respectivamente). Entre os reduzidos estão miR-124-3p, miR-141-3p (p<0.012; p<0.01, respectivamente) e a família miR-200 (200a/b/c, p<005). A construção de redes de interação demonstrou que miR-133a-3p e miR-133b, altamente expressos na endometriose, atuam regulando negativamente SMAD9 e GATA2, ambos reduzidos nas pacientes. Essa relação reforça a ideia de um loop regulatório desbalanceado: miRNAs aumentados reprimem fatores que, em condições normais, ajudariam a frear a fibrose. Ao mesmo tempo, miR-200b/c e miR-141-3p, que também regulam esses FTs, aparecem diminuídos, o que pode contribuir para a desorganização das vias celulares envolvidas na decidualização e reparo tecidual. Conclusão: os resultados obtidos na pesquisa destacam a importância da interação entre fatores de transcrição e miRNAs na regulação da fibrose associada à endometriose. A redução de SMAD9, combinada à superexpressão de miR-133a/b, sugere um loop epigenético que favorece a progressão da doença.