Soluble factors of peritoneal fluid from patients with endometriosis modulate the expression of immunoregulatory molecules on monocytes

К содержанию 4 . 2025 Резюме Введение. Эндометриоз представляет собой хроническое воспалительное заболевание, характеризующееся наличием эндометриальной ткани вне полости матки и затрагивающее около 10 % женщин репродуктивного возраста. Важную роль в патогенезе эндометриоза играет система иммунитета, включая моноциты, которые мигрируют из циркуляции в очаги эндометриоза. Однако изменения фенотипа и функций разных субпопуляций моноцитов при различных формах и стадиях эндометриоза остаются малоизученными. Цель исследования - изучение влияния растворимых факторов образцов перитонеальной жидкости (ПЖ), полученных от пациенток с различными стадиями эндометриоза, на функциональный фенотип моноцитов периферической крови здоровых доноров. Материал и методы. В исследование были включены 22 условно здоровых женщины-донора и 17 пациенток с различными формами эндометриоза (I-III стадии). Забор ПЖ осуществляли в начале лапароскопической операции. Мононуклеарные клетки периферической крови здоровых доноров инкубировали из ПЖ пациенток (v/v 10 %) в течение 24 ч. Методом проточной цитометрии оценивали содержание субпопуляций моноцитов и экспрессию на них маркеров MerTK, CCR2, PD1 и PD-L1. Результаты. В присутствии ПЖ пациенток с эндометриозом I стадии на фоне отсутствия значимых изменений в субпопуляционном составе моноцитов выявлено статистически значимое снижение экспрессии иммунорегуляторной молекулы MerTK (pW = 0,045) на классических моноцитах. При II и III стадиях эндометриоза растворимые факторы ПЖ не влияли на соотношение субпопуляций моноцитов, однако стимулировали экспрессию PD-L1 на промежуточных CD14++CD16+-моноцитах (pW = 0,018 для II стадии, pW = 0,033 для III стадии) и на классических (pW = 0,023 для II стадии) моноцитах, а также повышали уровень экспрессии хемокинового рецептора CCR2 на промежуточных моноцитах (vs контроль для II стадии pW = 0,009, для III стадии pW = 0,049). В присутствии ПЖ пациенток с эндометриозом III стадии в субпопуляции неклассических моноцитов выявлено повышение экспрессии (MFI) MerTK (pW = 0,014) и процентного содержания PD1-экспрессирующих клеток (pW = 0,021). В условиях инкубации клеток из ПЖ пациенток с эндометриозом III стадии были выявлены сильные положительные корреляции между экспрессией MerTK и (MFI) CCR2 (Rs = 0,94; p < 0,01), (MFI) MerTK и (MFI) PD-L1 (Rs = 0,89; p = 0,02), а также между (MFI) CCR2 и (MFI) PD-L1 (Rs = 0,83; p = 0,04) на неклассических моноцитах. Заключение. Влияние растворимых факторов ПЖ на фенотип моноцитов зависит от стадии эндометриоза. На начальных стадиях секреторные факторы эндометриоидных очагов способны влиять на субпопуляционный состав моноцитов, снижая экспрессию иммунорегуляторных молекул на классических моноцитах, что может свидетельствовать об изменении баланса их про- и противовоспалительной активности. На более продвинутых стадиях эндометриоза растворимые факторы ПЖ в большей степени оказывают стимулирующее влияние на формирование моноцитов с иммуносупрессивными свойствами. Дальнейший комплексный анализ моноцитарного звена иммунитета с учетом стадийности процесса позволит выявить новые патогенетические звенья и терапевтические мишени для разработки персонализированных методов лечения эндометриоза. Ключевые слова: эндометриоз; моноциты; перитонеальная жидкость; иммунорегуляторные маркеры; MerTK; CCR2; PD1; PD-L1; иммуносупрессия Для цитирования: Шифон С.А., Тыринова Т.В., Веретельникова Т.В., Лихачева В.В., Лихачев Б.А., Азарова О.В., Сисакян В.Г., Пасман Н.М., Останин А.А., Черных Е.Р. Растворимые факторы перитонеальной жидкости пациенток с эндометриозом модулируют экспрессию иммунорегуляторных молекул на моноцитах. Иммунология. 2025; 46 (4): 460-473. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2025-46-4-460-473 Финансирование. Работа выполнена в рамках плановой темы НИР ФГБНУ НИИФКИ Минобрнауки России FGMN-2024-0011 (рег. № 124112900022-0). Публикация результатов исследования в открытой печати разрешена. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Вклад авторов. Сбор и обработка материала - Шифон С.А., Тыринова Т.В., Веретельникова Т.В., Лихачева В.В., Лихачев Б.А., Азарова О.В., Сисакян В.Г.; написание текста, редактирование - Шифон С.А., Тыринова Т.В.; окончательный вариант и целостность текста - Пасман Н.М., Останин А.А., Черных Е.Р. Все авторы участвовали в редактировании статьи и одобрили ее окончательный вариант. Введение Эндометриоз представляет собой хроническое воспалительное заболевание, характеризующееся наличием эндометриальной ткани вне полости матки и затрагивающее около 10 % женщин репродуктивного возраста по всему миру [1]. Это состояние сопровождается гиперэстрогенией и хроническим воспалением, поражающим брюшину и органы малого таза, приводя к формированию перитонеальных спаек [1, 2]. Клинически эндометриоз проявляется болевым синдромом и бесплодием, значительно ухудшающими качество жизни пациенток [4]. Наряду с эндокринными и генетическими нарушениями важную роль в патогенезе эндометриоза играет система иммунитета [3, 4]. Рекрутируемые клетки иммунной системы (нейтрофилы, моноциты, макрофаги, НК- и В-клетки и др.) продуцируют различные провоспалительные медиаторы (ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-15, ФНО, RANTES, MCP-1) и формируют локальное воспалительное микроокружение, стимулируя миграцию, пролиферацию и инвазию эктопических эндометриальных клеток, прогрессию эндометриоза, а также ангиогенез. Многочисленные исследования продемонстрировали, что одним из преобладающих типов иммунных клеток при эндометриозе являются макрофаги с преимущественно М2-подобным фенотипом [6]. Однако роль макрофагов при эндометриозе неоднозначна и зависит от источника их происхождения. Так, показано, что перитонеальные тканевые макрофаги в эндометриоидных очагах секретируют противовоспалительные цитокины и факторы роста, что способствует выживанию, пролиферации клеток эндометрия и прогрессии заболевания [5]. С другой стороны, макрофаги моноцитарного происхождения, наоборот, могут оказывать протективное действие, препятствуя приживлению эктопического эндометрия и образованию новых очагов на брюшине [6]. Циркулирующие моноциты, мигрируя в очаги эндометриоза, не только являются системным резервуаром предшественников макрофагов, но и сами выполняют функцию фагоцитов, антиген-презентирующих клеток и продуцируют различные про- и противовоспалительные медиаторы. У человека в настоящее время выделяют три основных типа моноцитов: классические (CD14++CD16−), промежуточные (CD14++CD16+) и неклассические (CD14lowCD16++). Подобно большинству клеток иммунной системы, моноциты обладают функциональной дихотомией и могут участвовать не только в процессах индукции воспаления, но и в подавлении воспаления и формировании толерантности [2, 3]. Функциональное состояние субпопуляций моноцитов характеризуется экспрессией специфических поверхностных молекул, включая хемокиновые рецепторы, обеспечивающие их миграцию в очаги воспаления (CCR2), а также молекулы, участвующие в регуляции иммунного ответа (PD-1, PD-L1) или в разрешении воспаления (тирозинпротеинкиназа MerTK). В этом аспекте изменения фенотипа и функций различных субпопуляций моноцитов в условиях локального воспалительного микроокружения при различных формах и стадиях эндометриоза остаются малоизученными. Детальная характеристика моноцитов в зависимости от стадии заболевания может позволить глубже понять патогенетические механизмы, определяющие прогрессирование эндометриоза, а выявление специфических маркеров моноцитарной активации на системном уровне может способствовать разработке новых диагностических подходов и методов таргетной иммунотерапии [2]. Цель настоящего исследования - изучение влияния растворимых факторов образцов перитонеальной жидкости (ПЖ), полученных от пациенток с различными стадиями эндометриоза, на субпопуляционный состав и фенотип моноцитов периферической крови здоровых доноров. Материал и методы Участники исследования и дизайн исследования. В исследование были включены 22 условно здоровые женщины-доноры от 19 до 55 лет (средний возраст - 39,5 ± 10,8 года) и 17 пациенток с различными формами эндометриоза от 26 до 48 лет (средний возраст - 36,1 ± 6,8 года), проходивших лечение в ООО "Клиника профессора Пасман" г. Новосибирска и ООО "Эксперт" г. Новокузнецка с февраля по ноябрь 2024 г. Все исследования проводили после подписания информированного добровольного согласия, они одобрены ЛЭК ФГБНУ НИИФКИ Минобрнауки России (протокол ЛЭК № 144 от 21.02.2024). Диагноз эндометриоза был подтвержден гистологически после проведения лапароскопии с лечебной целью. В зависимости от стадии эндометриоза пациентки были разделены на три группы согласно классификации Российского общества акушеров-гинекологов: 1) I стадия (n = 4, минимальный эндометриоз), характеризующаяся поверхностными очагами на брюшине и яичниках без образования кист и значительного вовлечения окружающих тканей; 2) II стадия (n = 10, легкий эндометриоз), характеризующаяся появлением эндометриоидных кист яичников размерами до 5-6 см, более выраженным поражением брюшины и формированием спаечного процесса; 3) III стадия (n = 3, умеренный эндометриоз) с характерным наличием эндометриоидных кист яичников среднего размера с двух сторон, распространением процесса на крестцово-маточные связки и серозные покровы органов малого таза, а также с выраженным спаечным процессом [1]. Образцы тестировали в дублях или триплетах в 2-3 независимых экспериментах на материале от разных доноров. Суммарное количество исследованных образцов (n = 42) распределялось по стадиям эндометриоза: I стадия (n = 8), II стадия (n = 27), III стадия (n = 7). В качестве контроля были использованы интактные мононуклеарные клетки (МНК) здоровых доноров (n = 22). Критерии исключения: возраст младше 18 или старше 50 лет, наличие тяжелого сопутствующего заболевания с ожидаемой продолжительностью жизни менее года, декомпенсация функций жизненно важных систем организма (сердечно-сосудистой, почек, печени), инфекционные заболевания, септические состояния, ВИЧ-инфекция, онкологические заболевания в анамнезе или подозрение на злокачественное новообразование, клинически значимые изменения лабораторных показателей, беременность, лактация, алкогольная или наркотическая зависимость, лечение агонистами гонадотропин-рилизинг-гормона (аГнРГ) в течение полугода до включения в исследование, проведение гистероскопии перед забором ПЖ. Клинико-лабораторная характеристика пациенток. Детальная характеристика пациенток представлена в таблице. У 7 из 17 пациенток (41,2 %) был зарегистрирован повышенный уровень сывороточного онкомаркера CA-125. Отмечалась ассоциация между стадией заболевания и уровнем онкомаркера: в группе с I стадией эндометриоза показатели CA-125 находились в пределах референсных значений, в то время как при II стадии медиана составила 66 Ед/мл, а при III стадии достигала 136,50 Ед/мл. Эти данные свидетельствуют о тенденции к повышению уровня CA-125 с увеличением тяжести эндометриоза. Кроме того, в обследуемой группе отмечалась высокая частота сопутствующих соматических и гинекологических заболеваний. У 15 из 17 женщин (88,2 %) были диагностированы различные хронические заболевания, включая эндокринные нарушения (гипотиреоз, синдром поликистозных яичников и др.; 8/17; 47,1 %), заболевания желудочно-кишечного тракта (хронический холецистит, гастрит, панкреатит и др.; 7/17; 41,2 %), вегетососудистая дистония (2/17; 11,8 %), заболевания мочевыводящих путей (хронический цистит, пиелонефрит; 2/17; 11,8 %), железодефицитная анемия (2/17; 11,8 %). Воспалительные заболевания органов малого таза в анамнезе имели 8 (47,1 %) пациенток, при этом у некоторых отмечалась персистенция возбудителей (вирус простого герпеса, микоплазмоз). Предшествующие оперативные вмешательства (гистероскопия, резекция кист яичников, кесарево сечения) на органах малого таза перенесли 7 (41,2%) женщин. Статистический анализ с применением критериев Манна-Уитни и точного метода Фишера не выявил значимых различий в демографических и клинических параметрах между группами пациенток с различными стадиями эндометриоза (p > 0,05 для всех сравнений), что свидетельствует об однородности исследуемой когорты. Лабораторные исследования. Забор ПЖ осуществляли в начале операции, проводимой в I фазу менструального цикла. Для изучения влияния растворимых факторов ПЖ пациенток с эндометриозом объектом исследования служили моноциты периферической крови условно здоровых женщин-доноров, инкубированные из ПЖ. МНК доноров инкубировали в круглодонных 96-луночных планшетах (10 × 104 клеток/лунку) в присутствии 10 % аутологичной сыворотки и ПЖ (v/v 10 %) в течение 24 ч при 37 °С в СО₂-инкубаторе при 5 % СО₂. Контролем служили интактные МНК, культивируемые в отсутствии ПЖ. Культуры дублировали в 12 идентичных повторах с целью получения клеток в количестве, достаточном для проведения цитофлуориметрического анализа. По окончании культивирования клетки переносили из лунок планшета в цитометрические пробирки, объединяя идентичные лунки в одну пробу, и оценивали содержание субпопуляций моноцитов среди МНК, а также экспрессию на них поверхностных маркеров MerTK, CCR2, PD1 и PD-L1 методом проточной цитометрии (BD FACS Canto IITM, Becton Dickinson, США) с помощью флуорохром-конъюгированных моноклональных антител анти-CD14 (Pacific Blue, BD Biosciences, США), анти-CD16 (FITC, BD Biosciences, США) анти-HLA-DR (PerCP, BD Biosciences, США), анти-CCR2 (APC, BioLegend, США), анти-MerTK (APC, BioLegend, США), анти-PD-L1 (Pe, BD Biosciences, США) или анти-PD1 (АРС, BD Biosciences, США) согласно стандартной методике. Анализ относительного содержания субпопуляций моноцитов проводили с использованием параметров прямого и бокового светорассеяния, при этом в область гейтирования включали регион моноцитов, из которого далее выделяли гейт HLA-DR+-клеток [7]. Клетки с фенотипом CD14++CD16− относили к классическим; с фенотипом CD14++CD16+ - к промежуточным; с фенотипом CD14lowCD16++ - к неклассическим моноцитам. Для оценки уровня экспрессии молекул использовали показатель интенсивности флуоресценции моноклональных антител, связавшихся с соответствующим антигеном (MFI). В качестве негативного контроля использовали изотипические антитела, конъюгированные с аналогичными флуорохромами. Процент клеток, экспрессирующих соответствующие маркеры, рассчитывался на 10 000 клеток. Статистическая обработка. Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью программы Statistica 12.0. Описание непрерывных переменных выполнено в виде медианы (Me) и интерквартильного диапазона [25-й (LQ); 75-й (UQ) перцентили]. Тепловые карты были построены в Python с использованием библиотеки SciPy. Для выявления значимых различий использовали критерии Вилкоксона. Различия считали статистически значимыми при уровне значимости p < 0,05. Корреляционный анализ проводили методом ранговой корреляции Спирмена. Результаты Как видно из рис. 1, 24-часовая инкубация МНК здоровых доноров в присутствии ПЖ пациенток с эндометриозом I стадии не выявила статистически значимых изменений в субпопуляционном составе моноцитов из-за большого разброса показателей (классические CD14++CD16--моноциты: Ме 90,2 vs 83,8 %; pW = 0,054; неклассические CD14lowCD16+-моноциты: Ме 1,3 vs 3,5 %, pW = 0,06). ПЖ при эндометриозе II-III стадии также значимо не влияла на субпопуляционный состав моноцитов. В этом случае содержание всех трех субпопуляций моноцитов было сопоставимо с интактными МНК. Экспрессия хемокинового рецептора CCR2 Анализ экспрессии хемокинового рецептора CCR2 показал (рис. 2А), что в 24-часовых культурах интактных МНК во всех трех субпопуляциях моноцитов большинство клеток (> 60 %) экспрессируют CCR2 на достаточно высоком уровне (MFI > 2000). В присутствии ПЖ содержание CCR2-позитивных клеток, как правило, повышалось, достигая статистической значимости среди классических и промежуточных моноцитов под влиянием ПЖ пациенток с эндометриозом III и I стадий, соответственно (pW < 0,05). Кроме того, ПЖ пациенток со II и III стадиями эндометриоза статистически значимо усиливала экспрессию CCR2 на промежуточных моноцитах (MFI vs контроль для II стадии pW = 0,009, для III стадии pW = 0,049). Полученные данные о повышении экспрессии CCR2 под влиянием факторов ПЖ согласуются с результатами C. Weber и соавт., показавшими, что экспрессия CCR2 различается между субпопуляциями моноцитов и может модулироваться в зависимости от воспалительного микроокружения, существенно влияя на их миграционный потенциал [8]. Экспрессия тирозинпротеинкиназы Mer Одним из маркеров иммунорегуляторной активности клеток иммунной системы, в том числе моноцитов, является тирозинпротеинкиназа Mer (MerTK) [9]. Согласно полученным нами данным (рис. 2Б), в присутствии ПЖ I стадии эндометриоза интенсивность экспрессии MerTK статистически значимо снижалась на классических моноцитах (pW = 0,045), при этом на промежуточных моноцитах различия были недостоверными (pW = 0,058). ПЖ пациенток с III стадией эндометриоза, наоборот, усиливала экспрессию MerTK на неклассических моноцитах, достигая статистически значимого эффекта (Me MFI 3784 vs 2049; pW = 0,014). Экспрессия ингибиторных чекпойнт-молекул PD- L1 и PD-1 Особую роль в регуляции Т-клеточного иммунного ответа играет PD-L1/PD1-сигнальный путь [10]. Как видно из рис. 3А, 24-часовая инкубация МНК доноров с растворимыми факторами ПЖ пациенток с эндометриозом III стадии приводила к увеличению относительного количества промежуточных и неклассических PD-L1+-моноцитов, однако различия были статистически незначимыми (vs контроль pW = 0,16 и pW = 0,15 соответственно). Интенсивность экспрессии ингибиторного чекпойнт-лиганда PD-L1 в присутствии ПЖ пациенток с эндометриозом II стадии достоверно возрастала на классических и промежуточных моноцитах (vs контроль pW = 0,023 и pW = 0,018 соответственно). В популяции промежуточных моноцитов ПЖ пациенток с эндометриозом III стадии также усиливала экспрессию PD-L1 (vs контроль pW = 0,033). Растворимые факторы ПЖ пациенток с эндометриозом I стадии, наоборот, снижали уровень экспрессии PD-L1 на классических и промежуточных моноцитах, однако статистически значимых различий не выявлено. Стоит отметить, что растворимые факторы ПЖ пациенток с эндометриозом III стадии влияли не только на экспрессию PD-L1, но и на его рецептор PD1, наиболее полно описанный для Т-клеток [11]. Из данных, представленных на рис. 3Б, видно, что в присутствии ПЖ пациенток с эндометриозом III стадии относительное количество PD1-позитивных клеток значимо повышалось почти в 3 раза среди неклассических моноцитов (vs контроль pW = 0,021). Среди промежуточных моноцитов также отмечался существенный прирост PD1+-клеток в присутствии ПЖ пациенток с эндометриозом III стадии, однако статистически незначимый ввиду большого разброса значений в группе (vs контроль pW = 0,06). Следует отметить, что в этих субпопуляциях моноцитов интенсивность экспрессии PD1 также усиливалась, хотя и недостоверно. Корреляционный анализ Дополнительно мы провели корреляционный анализ между экспрессией изучаемых маркеров на субпопуляциях моноцитов, культивируемых с образцами ПЖ пациенток с эндометриозом (рис. 4). Согласно полученным нами данным, экспрессия MerTK прямо коррелировала с экспрессией PD-L1 на неклассических моноцитах, инкубированных из ПЖ пациенток с эндометриозом всех стадий (для всех p < 0,05) и на промежуточных моноцитах - в присутствии ПЖ пациенток с эндометриозом II стадии (Rs = 0,74; p < 0,01), в популяции классических моноцитов при инкубации из ПЖ пациенток с эндометриозом III стадии корреляция не достигала статистической значимости (Rs = 0,77; p = 0,07). Несмотря на отсутствие значимого влияния ПЖ пациенток с эндометриозом II стадии на экспрессию PD1 на моноцитах, в этом случае экспрессия MerTK также прямо коррелировала с экспрессией данного ингибиторного чекпойнт-рецептора: статистически значимо в классических моноцитах (Rs = 0,62; p < 0,01), в неклассических моноцитах корреляция была на границе статистической значимости (Rs = 0,42; p = 0,05). Обращает на себя внимание корреляционная связь между экспрессией хемокинового рецептора CCR2 и анализируемых нами иммунорегуляторных молекул MerTK и PD-L1. Как видно, экспрессия CCR2 значимо коррелировала с экспрессией PD-L1 на неклассических моноцитах в присутствии ПЖ пациенток с эндометриозом всех стадий. Кроме того, экспрессия CCR2 также прямо коррелировала с экспрессией MerTK на неклассических моноцитах в присутствии ПЖ пациенток с эндометриозом всех стадий, однако наиболее значимая связь была выявлена при инкубации клеток с ПЖ пациенток с эндометриозом I стадии (Rs = 0,90; p < 0,01). Также отмечена выраженная корреляционная связь между экспрессией CCR2 и MerTK (Rs = 0,89; p = 0,02) на классических моноцитах, инкубированных в присутствии ПЖ пациенток с эндометриозом III стадии. Полученные данные подтверждают трансформацию моноцитов к иммуносупрессивному фенотипу под влиянием растворимых факторов, присутствующих в перитонеальной жидкости при прогрессировании эндометриоза. Тепловая карта На рис. 5 результаты проведенных исследований суммированы и представлены в виде тепловой карты индивидуальных значений влияния ПЖ пациенток с эндометриозом I-III стадии на относительное содержание субпопуляций моноцитов, а также экспресссию на них MerTK, CCR2, PD1 и PD-L1 в культурах МНК здоровых доноров. Обсуждение Проведенное нами исследование впервые показало, что влияние растворимых факторов ПЖ пациенток с эндометриозом на фенотипические свойства моноцитов доноров зависит от стадии заболевания. При экспозиции МНК с образцами ПЖ, полученных от пациенток с минимальным эндометриозом (I стадия), значимых изменений в субпопуляционном составе моноцитов не выявлено, однако отмечается статистически значимое снижение экспрессии иммунорегуляторной молекулы MerTK на классических моноцитах. При более продвинутых стадиях эндометриоза (II и III стадии) при отсутствии изменений в структуре пула моноцитов растворимые факторы ПЖ оказывали стимулирующее влияние на экспрессию ингибиторного чекпойнт-лиганда PD-L1 на промежуточных моноцитах вместе с увеличением уровня экспрессии на них хемокинового рецептора CCR2, а также (при II стадии) стимулировали экспрессию PD-L1 на классических моноцитах. Кроме того, растворимые факторы ПЖ пациенток с наиболее распространенной III стадией эндометриоза влияли на фенотипические характеристики неклассических CD14lowCD16--моноцитов, стимулируя на них экспрессию MerTK, а также ингибиторного чекпойнт-рецептора PD1. Корреляционный анализ подтвердил, что экспрессия на неклассических моноцитах нескольких иммунорегуляторных молекул, прежде всего PD-L1 и MerTK, является сочетанной и, по-видимому, оказывает синергичное влияние на реализацию толерогенных/иммуносупрессорных свойств моноцитов при эндометриозе. Изменения в субпопуляциях моноцитов Выявленное статистически значимое снижение экспрессии MerTK на классических моноцитах в присутствии ПЖ пациенток с минимальным эндометриозом может свидетельствовать об участии клеток в инициации воспалительной реакции, направленной на элиминацию эктопических очагов эндометрия на начальных этапах заболевания, что согласуется с данными K.A. Burns и соавт., полученными на экспериментальной модели эндометриоза у мышей [12], и результатами D. Fan и соавт., демонстрирующими преобладание провоспалительных факторов в ПЖ, эктопических очагах и эутопическом эндометрии на ранних стадиях заболевания [13]. Обнаруженное нами снижение экспрессии MerTK на классических моноцитах при I стадии может свидетельствовать об угнетении противовоспалительных механизмов, что согласуется с данными работы C. Hogg и соавт., в которой показано преобладание провоспалительных M1-макрофагов на ранних стадиях эндометриоза [14]. Вероятно, на начальном этапе эндометриоза в ПЖ повышается содержание провоспалительных цитокинов, таких как ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8 [15- 17], которые активируют классические моноциты и стимулируют их дифференцировку в М1-макрофаги, инициирующие воспалительный ответ с целью элиминации эктопических очагов. Изменения в экспрессии маркеров на субпопуляциях Значительное повышение экспрессии PD-L1 и CCR2 на классических и промежуточных моноцитах, наблюдаемое нами при II стадии эндометриоза, отражает баланс про- и противовоспалительных факторов и стимуляцию иммунорегуляторных процессов на этом этапе заболевания. Сходные тенденции в отношении поляризации макрофагов были получены M.F. Nie и соавт., которые показали, что ПЖ пациенток с эндометриозом индуцирует поляризацию макрофагов в M2-фенотип через активацию передачи сигналов Smad2/Smad3, однако авторы не анализировали эти изменения в зависимости от стадии заболевания [18]. Эти изменения в экспрессии PD-L1 и CCR2 свидетельствуют о постепенном смещении баланса в сторону противовоспалительных и иммуносупрессивных механизмов. Ключевыми факторами, опосредующими данную трансформацию, могут быть противовоспалительные цитокины, такие как ИЛ-10 и трансформирующий фактор роста β (ТФРβ) [19, 20], ростовые факторы, в частности фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) [21], а также хемокин CCL2, стимулирующий рекрутирование CCR2+-моноцитов [22]. Мы предполагаем, что под влиянием данных медиаторов моноциты могут приобретать иммунорегуляторный фенотип с повышенной экспрессией PD-L1, что может способствовать подавлению Т-клеточного иммунного ответа, однако это гипотеза требует экспериментального подтверждения. Выраженные изменения фенотипа неклассических моноцитов в сторону повышения экспрессии MerTK, PD1 и PD-L1, обнаруженные нами при инкубации с ПЖ III стадии, указывают на формирование иммуносупрессивного фенотипа на поздних стадиях эндометриоза. Активация MerTK приводит к ингибированию сигнального пути NF-κB через SOCS1/3, что существенно снижает провоспалительный ответ и способствует формированию толерогенного микроокружения [23]. Примечательно, что экспрессия PD1 и PD-L1 также участвует в подавлении NF-κB-опосредованных воспалительных реакций, усиливая иммуносупрессивный эффект [24]. MerTK выполняет многогранную функцию в регуляции воспалительных процессов: помимо ингибирования NF-κB, этот рецептор активирует 5-липоксигеназный путь, что способствует продукции специализированных проразрешающих медиаторов (SPM), включая резолвины серии D и E, ответственных за разрешение воспаления [25]. Кроме того, MerTK модулирует процессы программируемой клеточной гибели, регулируя апоптоз через активацию PI3K/Akt-сигнального пути [26]. Эти данные дополняют результаты H.L. Yang и соавт. о нарушении цитотоксичности НК-клеток макрофагами и Treg через секрецию ИЛ-10 и ТФРβ при III-IV стадиях заболевания [27]. На поздних стадиях прогрессирование эндометриоза ассоциировано с формированием выраженного системного подавления иммунитета, обусловленного секрецией противовоспалительных факторов, таких как ИЛ-10, ТФРβ [27], индоламин-2,3-диоксигеназа (IDO) [28] и простагландин E2 (PGE2) [29], самими эндометриоидными клетками и опухоль-ассоциированными макрофагами. Эти медиаторы стимулируют дифференцировку моноцитов в М2-подобный иммуносупрессивный фенотип с высокой экспрессией MerTK, PD1 и PD-L1, который подавляет противоопухолевый иммунитет и способствует избеганию иммунного надзора. Альтернативная активация моноцитов сопровождается повышенной экспрессией скавенджер-рецептора CD163, который является характерным маркером М2-фенотипа [30]. Таким образом, наше исследование показывает, что по мере прогрессирования эндометриоза при инкубации с ПЖ наблюдаются изменения фенотипа моноцитов, что может быть связано со сменой спектра цитокинов и медиаторов, однако это предположение требует дальнейшего изучения. Наши данные позволяют предположить: если на начальных этапах преобладают провоспалительные стимулы, то на поздних стадиях растворимые факторы ПЖ могут способствовать формированию моноцитов с иммуносупрессивными свойствами. При этом выраженность толерогенной активации определяется характером предшествующих воспалительных стимулов: макрофаги, активированные через различные паттерн-распознающие рецепторы, формируют неодинаковую степень толерантности, что может объяснять наблюдаемые стадийные особенности иммуносупрессивного микроокружения при эндометриозе [31]. В целом представленный нами анализ позволил детально охарактеризовать поэтапные изменения фенотипа и функций различных субпопуляций моноцитов в зависимости от стадии эндометриоза и дополнил существующие представления о роли моноцитов/макрофагов в иммунопатогенезе заболевания, описанной в литературе [5, 32, 33]. Заключение Несмотря на значительный прогресс в лечении эндометриоза, достигнутый благодаря применению гормональной терапии, результаты лечения весьма вариабельны и во многом определяются индивидуальными характеристиками иммунного ответа. Проведенное нами исследование конкретизирует представление об изменении фенотипических и функциональных свойств субпопуляций моноцитов в условиях воздействия растворимых факторов, продуцируемых при эндометриозе различных стадий. Дальнейшее изучение моноцитарного звена иммунитета с учетом стадийности процесса позволит выявить новые патогенетические звенья и терапевтические мишени для разработки персонализированных методов лечения эндометриоза. Обнаруженные нами закономерности трансформации фенотипа моноцитов открывают перспективы для создания таргетных иммунотерапевтических подходов, модулирующих моноцитарное звено в зависимости от стадии заболевания, а также могут способствовать разработке персонализированных схем лечения, позволяющих добиться стойкой ремиссии и предотвратить рецидивы. Литература 1. Эндометриоз. Клинические рекомендации. Москва : Министерство здравоохранения Российской Федерации. 2024. 2. Chen S., Liu Y., Zhong Z., Wei C., Liu Y., Zhu X. Peritoneal immune microenvironment of endometriosis: Role and therapeutic perspectives. Front. Immunol. 2023; 14: 1134663. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2023.1134663 3. Короткова Т.Д., Адамян Л.В., Степанян А.А., Кречетова Л.В., Ванько Л.В. Клеточные и молекулярные факторы врожденного иммунитета в патогенезе наружного генитального эндометриоза у женщин (обзор литературы). Проблемы репродукции. 2018; 24 (6): 22-31. DOI: https://doi.org/10.17116/repro20182406122 4. Koninckx P.R., Ussia A., Adamyan L., Wattiez A., Gomel V., Martin D.C. Pathogenesis of endometriosis: the genetic/epigenetic theory. Fertil. Steril. 2019; 111 (2): 327-40. DOI: https://doi.org/10.1016/j.fertnstert.2018.10.013 5. Fan D., Wang X., Shi Z., Jiang Y., Zheng B., Xu L., Zhou S. Understanding endometriosis from an immunomicroenvironmental perspective. Chin. Med. J. 2023; 136 (16): 1897-909. DOI: https://doi.org/10.1097/CM9.0000000000002649 6. Hogg C., Panir K., Dhami P., Rosser M., Mack M., Soong D., Pollard J.W., Jenkins S.J., Horne A.W., Greaves E. Macrophages inhibit and enhance endometriosis depending on their origin. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2021; 118 (6): e2013776118. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.2013776118 7. Ziegler-Heitbrock L. Blood monocytes and their subsets: Established features and open questions. Front. Immunol. 2015; 6: 423. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2015.00423 8. Weber C., Belge K.U., von Hundelshausen P., Draude G., Steppich B., Mack M., Frankenberger M., Weber K.S., Ziegler-Heitbrock H.W. Differential chemokine receptor expression and function in human monocyte subpopulations. J. Leukoc. Biol. 2000; 67 (5): 699-704. DOI: https://doi.org/10.1002/jlb.67.5.699 9. Cai B., Thorp E.B., Doran A.C., Subramanian M., Sansbury B.E., Lin C.S., Spite M., Fredman G., Tabas I. MerTK cleavage limits proresolving mediator biosynthesis and exacerbates tissue inflammation. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2016; 113 (23): 6526-31. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.1524292113 10. Suszczyk D., Skiba W., Zardzewiały W., Pawłowska A., Włodarczyk K., Polak G., Tarkowski R., Wertel I. Clinical Value of the PD-1/PD-L1/PD-L2 pathway in patients suffering from endometriosis: A comprehensive analysis of soluble checkpoint molecule concentrations in peritoneal fluid and plasma, and their correlations with disease severity, immune cell subsets, and prognostic implications. Int. J. Mol. Sci. 2022; 23 (19): 11607. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms231911607 11. Crespo J., Sun H., Welling T.H., Tian Z., Zou W. T cell anergy, exhaustion, senescence, and stemness in the tumor microenvironment. Curr. Opin. Immunol. 2013; 25 (2): 214-21. DOI: https://doi.org/10.1016/j.coi.2012.12.003 12. Burns K.A., Thomas S.Y., Hamilton K.J., Young S.L., Cook D.N., Korach K.S. Early endometriosis in females is directed by immune-mediated estrogen receptor α and IL-6 сross-talk. Endocrinology. 2018; 159 (1): 103-18. DOI: https://doi.org/10.1210/en.2017-00562 13. Fan D., Wang X., Shi Z., Jiang Y., Zheng B., Xu L., Zhou S. Understanding endometriosis from an immunomicroenvironmental perspective. Chin. Med J. 2023; 136 (16): 1897-909. DOI: https://doi.org/10.1097/CM9.0000000000002649 14. Hogg C., Horne A.W., Greaves E. Endometriosis-associated macrophages: origin, phenotype, and function. Front. Endocrinol. 2020; 11: 7. DOI: https://doi.org/10.3389/fendo.2020.00007 15. Sikora J., Mielczarek-Palacz A., Kondera-Anasz Z. Imbalance in cytokines from interleukin-1 family - role in pathogenesis of endometriosis. Am. J. Reprod. Immunol. 2012; 68 (2): 138-45. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1600-0897.2012.01147.x 16. Kalu E., Sumar N., Giannopoulos T., Patel P., Croucher C., Sherriff E., Bansal A. Cytokine profiles in serum and peritoneal fluid from infertile women with and without endometriosis. J. Obstet. Gynaecol. Res. 2007; 33 (4): 490-5. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1447-0756.2007.00569.x 17. Кокинос Е.К., Кузьмина Д.О., Кучур О.А., Цымбал С.А., Василичин В.А., Галочкина А.В., Завирский А.В., Башарин В.А., Штро А.А., Штиль А.А., Духинова М.С. Фенотипический и функциональный анализ линии моноцитов THP-1 как модели воспаления. Иммунология. 2022; 43 (3): 277-87. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-3-277-287 18. Nie M.F., Xie Q., Wu Y.H., He H., Zou L.J., She X.L., Wu X.Q. Serum and ectopic endometrium from women with endometriosis modulate macrophage M1/M2 polarization via the Smad2/Smad3 pathway. J. Immunol. Res. 2018; 2018: 6285813. DOI: https://doi.org/10.1155/2018/6285813 19. Itoh F., Komohara Y., Takaishi K., Honda R., Tashiro H., Kyo S., Katabuchi H., Takeya M. Possible involvement of signal transducer and activator of transcription-3 in cell-cell interactions of peritoneal macrophages and endometrial stromal cells in human endometriosis. Fertil. Steril. 2013; 99 (6): 1705-13. DOI: https://doi.org/10.1016/j.fertnstert.2013.01.133 20. Guo S.W, Du Y., Liu X. Platelet-derived TGF-β1 mediates the down-modulation of NKG2D expression and may be responsible for impaired natural killer (NK) cytotoxicity in women with endometriosis. Hum. Reprod. 2016; 31 (7): 1462-74. DOI: https://doi.org/10.1093/humrep/dew057 21. McLaren J., Prentice A., Charnock-Jones D.S., Smith S.K. Vascular endothelial growth factor (VEGF) concentrations are elevated in peritoneal fluid of women with endometriosis. Hum. Reprod. 1996; 11 (1): 220- 3. DOI: https://doi.org/10.1093/oxfordjournals.humrep.a019023 22. Arici A., Oral E., Attar E., Tazuke S.I., Olive D.L. Monocyte chemotactic protein-1 concentration in peritoneal fluid of women with endometriosis and its modulation of expression in mesothelial cells. Fertil. Steril. 1997; 67 (6): 1065-72. DOI: https://doi.org/10.1016/s0015-0282(97)81440-9 23. Lee Y.J., Han J.Y., Byun J. et al. Inhibiting Mer receptor tyrosine kinase suppresses STAT1, SOCS1/3, and NF-κB activation and enhances inflammatory responses in lipopolysaccharide-induced acute lung injury. Journal of Leukocyte Biology. 2012; 91 (6): 921-32. DOI: https://doi.org/10.1189/jlb.0611289 24. Bally A.P., Austin J.W., Boss J.M. Genetic and epigenetic regulation of PD-1 expression. Journal of Immunology. 2016; 196 (6): 2431-37. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.1502643 25. Cai B., Thorp E.B., Doran A.C. et al. MerTK cleavage limits proresolving mediator biosynthesis and exacerbates tissue inflammation. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2016; 113 (23): 6526-31. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.1524292113 26. Lemke G. Biology of the TAM receptors. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 2013; 5 (11): a009076. DOI: https://doi.org/10.1101/cshperspect.a009076 27. Yang H.L., Zhou W.J., Chang K.K., Mei J., Huang L.Q., Wang M.Y., Meng Y., Ha S.Y., Li D.J., Li M.Q. The crosstalk between endometrial stromal cells and macrophages impairs cytotoxicity of NK cells in endometriosis by secreting IL-10 and TGF-β. Reproduction. 2017; 154 (6): 815-25. DOI: https://doi.org/10.1530/REP-17-0342 28. Mei J., Jin L.P., Ding D., Li M.Q., Li D.J., Zhu X.Y. Inhibition of IDO1 suppresses cyclooxygenase-2 and matrix metalloproteinase-9 expression and decreases proliferation, adhesion and invasion of endometrial stromal cells. Mol. Hum. Reprod. 2012; 18 (10): 467-76. DOI: https://doi.org/10.1093/molehr/gas021 29. Sacco K., Portelli M., Pollacco J., Schembri-Wismayer P., Calleja-Agius J. The role of prostaglandin E2 in endometriosis. Gynecol. Endocrinol. 2012; 28 (2): 134-8. DOI: https://doi.org/10.3109/09513590.2011.588753 30. Сотникова Н.Ю., Фарзалиева А.В., Борзова Н.Ю., Воронин Д.Н., Крошкина Н.В. Характеристика дифференцировки моноцитов и экспрессии CD163 у женщин с угрожающим ранним выкидышем. Иммунология. 2022; 43 (6): 714-21. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-6-714-721 31. Николаева А.М., Максимчик П.В., Пащенков М.В. Сравнительная характеристика макрофагов, толерантных к агонистам рецепторов NOD1 и TLR4. Иммунология. 2021; 42 (2): 102-11. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-2-102-111 32. Зайратьянц О.В., Адамян Л.В., Манукян Л.М., Калинин Д.В., Арсланян К.Н. Экспрессия моэзина, p21-активированной киназы 4 (PAK 4), матриксных металлопротеиназ (ММР 2, ММР 9) и CD34 в эутопическом и эктопическом эндометрии при аденомиозе. Архив патологии. 2018; 80 (6): 14-21. DOI: https://doi.org/10.17116/patol20188006114 33. Symons L.K., Miller J.E., Kay V.R., Marks R.M., Liblik K., Koti M., Tayade C. The immunopathophysiology of endometriosis. Trends Mol. Med. 2018; 24 (9): 748-62. DOI: https://doi.org/10.1016/j.molmed.2018.07.004 Журналы «ГЭОТАР-Медиа»