{"paper_id":"ca8711a4-28a1-4ecd-b302-0abe3b0079c6","body_text":"Эндометриоз – хроническое воспалительное заболевание с высокой распространенностью и серьезными репродуктивными и общими последствиями для здоровья [1, 2]. Эндометриоз является одним из наиболее распространенных доброкачественных гинекологических новообразований у женщин в пременопаузе и затрагивает, по различным оценкам, 10–15% женщин репродуктивного возраста [3]. Несмотря на многолетние исследования, патогенетические механизмы заболевания остаются невыясненными, а методы диагностики и лечения – малоэффективными. Это заболевание представляет значимую проблему общественного здравоохранения, сильно влияющую на качество жизни женщин, а также являющуюся значительным экономическим бременем.\nВ соответствии с клиническими проявлениями различают 3 фенотипа заболевания: перитонеальный эндометриоз (ПЭ), эндометриома яичников и глубокий инфильтративный эндометриоз (ГЭ) [4]. Понятие ГЭ подразумевает инфильтрацию эндометриоза глубже 5 мм под брюшиной и представляет собой наиболее агрессивную форму заболевания. ГЭ имеет общие признаки злокачественных заболеваний: повышенная пролиферативная и сниженная апоптотическая активность, инвазивность, адгезивность, склонность к метастазированию; может трансформироваться в злокачественные опухоли [5, 6]. Это дает основание предполагать возможность использования методов терапии рака и для ГЭ. В связи с этим представляют интерес рецепторы эфрина (Eph), которые зарекомендовали себя в экспериментальных исследованиях на животных в качестве перспективной мишени при лечении рака [7].\nЭфриновые рецепторы (Eph) входят в семейство рецепторных тирозинкиназ, участвующих в эмбриогенезе, управляя ростом органов межклеточными коммуникациями [8]. Eph экспрессируются на поверхности клеточной мембраны, и их функциональная активация осуществляется путем связывания с соответствующим лигандом, эфрином. Тирозинкиназы рецепторов Eph и их лиганды эфрина являются критическими регуляторами передачи сигналов и формирования паттерна, зависящими от клеточных контактов. Связывание Eph/ephrin может приводить к активации различных биологических функций, таких как адгезия, или отталкивание, или повышенная или сниженная подвижность [9]. Патологическое повышение или снижение экспрессии Eph ассоциируется с различными заболеваниями – раком, сердечно-сосудистыми заболеваниями, болезнями мозга и др. [10]. В связи с этим Eph представляют интерес в качестве терапевтических мишеней при лечении различных заболеваний [11].\nРецептор EphA1 впервые был обнаружен в линии клеток рака печени человека, продуцирующих эритропоэтин, в 1987 г., показана его повышенная экспрессия (сверхэкспрессия) при различных видах рака человека, включая карциному желудка, колоректальный рак, рак яичников и молочной железы [12]. Рецептор регулирует многие аспекты биологии опухоли, выживаемости пациентов и рассматривается в качестве терапевтической мишени для лечения рака [13]. В то же время мы не нашли в поисковых системах работ по экспрессии EphA1 при РЭ. Аналогично не обнаружили работ по экспрессии рецептора в эутопическом и эктопическом эндометрии при эндометриозе.\nВ связи с этим целью настоящей работы было провести сравнительное исследование экспрессии EphA1 на мембране эпителиоцитов желез слизистой тела матки у пациенток с эндометриозом и РЭ методом иммуногистохимии.\nМатериалы и методы\nРабота выполнена на базе ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России.\nДля проведения исследования из 46 пациенток были сформированы 4 группы: 1-ю группу составили 20 женщин с ГЭ (10 – в пролиферативной, 10 – в секреторной фазе менструального цикла (МЦ)), 2-ю – 21 женщина с ПЭ (12 – в пролиферативной, 8 – в секреторной фазе МЦ), 3-ю – 6 женщин с РЭ (высокодифференцированный эндометриоидный гистологический тип, стадия FIGO Ia рT1aNxMO), 4-ю (контрольную) группу составили 9 женщин без эндометриоза, прооперированных по поводу трубно-перитонеального фактора бесплодия, у которых по данным гистологического заключения не выявлено эндометриоза и других патологических изменений в эндометрии. Группы дополнительно разделены на подгруппы в зависимости от фазы МЦ накануне операции. Критериями исключения послужили: наличие тяжелых экстрагенитальных заболеваний и другой онкопатологии. Все пациенты подписали информированное согласие на участие в данном исследовании. Исследование было одобрено Этическим комитетом ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России.\nДля полуколичественной оценки экспрессии EphA1 использовали стандартную технику иммуногистохимического окрашивания депарафинизированных препаратов антителами, как описано ранее [14]. Для выявления EphA1 использовали антитела фирмы Abcam Inc – кроличьи поликлональные антитела клона ab217363 в разведении 1:200 и в качестве вторичных антител – козий антикроличий иммуноглобулин IgG H&L (HRP) – клон ab205718. В качестве отрицательного контроля использовали срезы, окрашенные без специфических антител.\nСтатистический анализ\nСтатистический анализ проводили с использованием пакета программ MedCalc Statistical Software 11.5.0. Статистическую значимость между сравниваемыми группами определяли с применением непараметрического U-критерия Манна–Уитни. Данные представлены в виде медианы (Ме) и квартилей Q1 и Q3 в формате Ме (Q1; Q3). Уровень статистической значимости при проверке нулевой гипотезы считали соответствующим p<0,5.\nРезультаты\nДанные, представленные в таблице, показывают, что на мембране эпителиоцитов желез слизистой тела матки у пациенток без патологии эндометрия экспрессия рецептора EphA1 значимо более высокая в секреторной фазе, чем в пролиферативной (35,0 и 22.0 у.е. соответственно, р=0,003, рисунок, А, Б).\nУровень экспрессии рецептора на мембране эпителиоцитов желез в раковых клетках эндометрия значимо превосходил экспрессию в клетках нормального эндометрия как в пролиферативной, так и в секреторной фазах (46,0 у.е., p=0,003, таблица, рисунок, В), что указывает на аномально повышенный (сверхэкспрессированный) уровень EphA1 в раковых клетках (рисунок, Д).\nПри ПЭ экспрессия EphA1 на мембране эпителиоцитов желез в эутопическом эндометрии значимо не отличалась от таковой в контрольной группе в соответствующих фазах цикла. В то же время на поверхностных очагах на брюшине повышенная экспрессия рецептора выявилась в пролиферативной, но не в секреторных фазах цикла (таблица).\nУ пациентов с ГЭ на мембране эпителиоцитов желез в эутопическом эндометрии повышенная экспрессия EphA1 выявлялась только в пролиферативной фазе: 32,5 у.е. по сравнению с 22,0 у.е. в норме (р=0,009). В секреторной фазе цикла экспрессия EphA1 на мембране эпителиоцитов желез эутопического эндометрия была на том же уровне, что и в нормальном эндометрии, – 36,0 у.е. У этих же пациентов на мембране эпителиоцитов желез в эктопических очагах на брюшине, представляющих собой поверхностную форму эндометриоза, повышенная экспрессия EphA1 выявлялась также только в пролиферативной (41,0 у.е., р=0,003), но не в секреторной фазе цикла (таблица).\nЗначимо повышенная экспрессия EphA1 и в пролиферативной, и секреторной фазах была выявлена на эпителиоцитах желез в глубоко инфильтративных очагах пациентов с ГЭ (48,0, р=0,002 и 52,0, р=0,001 соответственно). При этом экспрессия в обеих фазах цикла была на уровне экспрессии на поверхности эпителиоцитов желез пораженного РЭ, что иллюстрирует фотография Д на рисунке.\nОбсуждение\nЭфриновые рецепторы и их лиганды-эфрины находятся на поверхности клеток, и взаимодействие между ними, осуществляемое путем межклеточного контакта, активирует широкий спектр сигнальных путей, направленных на пролиферацию, апоптоз, дифференцировку, клеточную адгезию, миграцию [15]. EphA1 вместе с его основным лигандом EphrinА1 играет важную роль в обеспечении репродуктивной функции путем регуляции фолликулогенеза, овуляции, транспорта эмбрионов, имплантации и формирования плаценты [16]. EphA1 экспрессируется на внешней мембране эпителиальных клеток эндометрия, тогда как его лиганд EphrinА1 выявляется на внешней мембране клеток бластоцистов, что опосредует установление маточной имплантации и обеспечивает пролиферацию и инвазию трофобласта в толщу децидуальной ткани [17]. Процесс прикрепления эмбриона приходится на секреторную фазу менструального цикла, что объясняет выявленную в нашей работе повышенную экспрессию EphA1 именно в этой фазе. В секреторной фазе формируется рецептивность эндометрия, важным фактором которой является разрастание кровеносной сосудистой системы в толще эндометрия, обеспечивающееся повышенной экспрессией в этот период ангиогенных факторов [18]. Китайскими исследователями было показано, что EphA1 активирует ангиогенез путем прямой стимуляции сигнальной системы SDF-1/CXCR4, контролирующей рост сосудистой системы в ткани [19].\nПовышенная экспрессия EphA1 выявлялась при многих видах рака, в том числе и при раке яичников и цервикального канала [16, 20]. Целенаправленное ингибирование этой экспрессии на экспериментальных моделях часто сопровождается торможением различных стадий онкологического процесса. В связи с этим эфриновые рецепторы в последнее время рассматриваются как перспективные мишени для терапии различных онкологических заболеваний [21]. Мы не обнаружили в поисковых системах публикаций по экспрессии EphA1 при злокачественных поражениях эндометрия. Проведенные нами исследования показали, что и при РЭ, в частности ранней форме рака (высокодифференцированный эндометриоидный гистологический тип, стадия FIGA Ia рT1aNxM0), выявляется значимо повышенная, по сравнению с нормой, экспрессия EphA1, что может быть использовано в дальнейшем для разработки терапии заболевания.\nЭндометриоз, особенно ГЭ, имеет ряд общих биологических процессов со злокачественными заболеваниями, в регуляции которых участвуют эфриновые рецепторы [5]. Ранее нами было показано, что EphA2 при ГЭ проявляет повышенную экспрессию на поверхности эпителиоцитов желез эктопического эндометрия пациентов с ГЭ, схожую со сверхэкспрессированным уровнем в раковых клетках эндометрия [22]. Аналогично было показано, что EphB4 проявляет повышенную экспрессию в эктопическом эндометрии по сравнению с эутопическим [23]. Более того, в экспериментах с трансплантированными мышами показано, что подавление экспрессии EphB4 приводит к торможению роста эндометриоидных клеток путем ингибирования ангиогенеза [24].\nВ нашем исследовании была выявлена повышенная экспрессия EphA1 в эутопическом эндометрии в пролиферативной фазе цикла при ГЭ, но не в контрольной (здоровой) группе или у пациенток с ПЭ, что может быть обусловлено повышенным уровнем системного воспалительного ответа при ГЭ. Однако в секреторной фазе повышения экспрессии рецептора в эутопическом эндометрии пациенток с ГЭ мы не обнаружили. На сегодняшний день нет публикаций по экспрессии EphA1 в эндометриоидных тканях, и необходимы дальнейшие исследования для понимания особенности его функции. Однако выявленная повышенная экспрессия EphA1 в эндометрии женщин с ГЭ в пролиферативной фазе в дальнейшем может быть использована для дифференциации эндометриоза по тяжести заболевания.\nВ эктопических очагах на брюшине и при ПЭ, и при ГЭ повышенная экспрессия рецептора выявилась только в пролиферативной фазе, но не в секреторной. В то же время на мембране эпителиоцитов желез в инфильтративных очагах эндометрия выявилась значимо повышенная экспрессия EphA1 в обеих фазах цикла, не уступавшая экспрессии в аналогичных тканях пораженных РЭ. Эта сверхэкспрессия еще раз подтверждает наличие общих механизмов патогенеза при раке и эндометриозе.\nЗаключение\nПредставленные данные открывают новые перспективы в понимании молекулярных процессов, участвующих в патогенезе эндометриоза и РЭ. Повышенный сверхэкспрессированный уровень EphA1 делает его перспективной мишенью для лечения как ГЭ, так и РЭ. Необходимо провести дальнейшее исследование в данном направлении, чтобы понять механизм развития патологических процессов, лежащих в основе бесплодия и болевых симптомов у женщин с эндометриозом.","source_license":"CC0","license_restricted":false}