{"paper_id":"79057bbc-5207-4e42-868d-d209bcb7cef3","body_text":"1475\nP450 Arom y microambiente\nestrogénico en endometrios\neutópicos de mujeres con\nendometriosis\nM Cecilia Johnson Pa, Claudio Pinto Ob,\nAlessandra Alves Lc, Alberto Palomino A,\nAriel Fuentes G, M Angélica Boric Sa, Margarita Vega Ba.\nP450Arom and estrogenic\nmicroenvironment of eutopic\nendometria in endometriosis\nBackground: Endometriosis, a common gynecologic disorder char-\nacterized by endometrial glands and stroma outside the uterus, is diagnosed by direct visualiza-\ntion of peritoneal and ovarian implants during laparoscopy. Aim: To study the estrogenic\nmicroenvironment in eutopic endometria of women with and without endometriosis. Patients\nand methods : Eutopic endometria, obtained during laparoscopy from 23 women with en-\ndometriosis and 20 fertile cyclic women undergoing tubal sterilization, was studied. P\n450Arom\nmRNA expression (RT-PCR) was measured. Also, P 450Arom activity was assessed measuring test-\nosterone conversion to estradiol and the concentration of this last hormone in cultured endometri-\nal explants. Results: Age and body mass index was similar in both groups studied. Seventy nine\npercent of endometria from women with endometriosis and in 29.4% from control group ex-\npressed P\n450Arom mRNA (p <0.01). The intensity of the band was higher in secretory endometria\nfrom women with endometriosis when compared to controls (p <0.01), but it was similar during\nthe proliferative phase. Estradiol secretion to the culture media by proliferative endometria ex-\nplants from women with endometriosis was 3-fold higher than secretory endometria (p <0.01) and\nendometria from control women in both phases. P\n450Arom activity, in the presence of testosterone,\nwas 7-fold higher in endometrial cultures from women with endometriosis, when compare with\nthe basal culture (p <0.01). However, in endometrial explant cultures from control women, this\nactivity was not statistical different. Conclusions: These results indicate that in women with en-\ndometriosis, the microenvironment in the endometria is estrogenic as a consequence of an in-\ncreased expression and activity of the P\n450Arom (Rev Méd Chile 2004; 132: 1475-82).\n(Key Words: Aromatase; Cytochrome P450; Endometriosis; Genital neoplasms, female: P450 AROM)\nRecibido el 8 de abril, 2004. Aceptado en versión corregida el 29 de septiembre, 2004.\nTrabajo financiado por proyecto DID ENL 03/05 Universidad de Chile y parcialmente\nFONDECYT #1040412.\nInstituto de Investigaciones Materno-Infantil, Hospital Clínico San Borja Arriarán, Facultad\nde Medicina, Universidad de Chile.\naBioquímica; bTesista, Facultad de Medicina, Universidad de Chile; cTesista, Facultad de\nCiencias Médicas, Universidad de Santiago de Chile.\nRev Méd Chile 2004; 132: 1475-1482\nCorrespondencia a: M Cecilia Johnson P. IDIMI, Santa Rosa\n1234. Fax: 4247240. E mail: cjohnson@med.uchile.cl\nA RTÍCULO  DE\nINVESTIGACIÓN\n\n1476\nL\na endometriosis es un desorden ginecológico\ninvasivo benigno caracterizado por la presen-\ncia de tejido endometrial viable (glándulas y\nestroma) fuera de la cavidad uterina. Su etiología,\npobremente entendida y aún en estudio, está\nasociada con la compleja fisiología reproductiva\nde las especies que menstrúan. Esta patología,\nasociada con infertilidad, requiere de terapia\nquirúrgica o farmacológica y constituye un proble-\nma de salud mayor para la mujer en edad\nreproductiva\n1-4.\nEs conocido que la endometriosis es una\npatología heterogénea que se desarrolla en mujeres\nen edad reproductiva e involuciona espontánea-\nmente después de la menopausia. La supresión\nmedicamentosa de los niveles de estradiol, median-\nte inhibidores de la enzima aromatasa o de agonis-\ntas de la hormona liberadora de gonadotrofinas\n(GnRH), produce una regresión de la patología\n5-7.\nSin embargo, una vez reestablecidos los niveles de\nestrógenos, la enfermedad puede recidivar sugi-\nriendo una dependencia de éstos.\nSe ha comunicado que la histología de endo-\nmetrios de ubicación normotópica de mujeres con\nendometriosis no es diferente a la del endometrio\nnormal; por el contrario, su fisiología estaría\nalterada, afectando la expresión de numerosos\nfactores, entre otros la biosíntesis y el metabolis-\nmo esteroidal local, principalmente estradiol\n8-10.\nComo es sabido, la conversión de androstenedio-\nna y testosterona a estrona y estradiol, respectiva-\nmente, es catalizada por el complejo enzimático\naromatasa, constituido por el citocromo P\n450 co-\nnocido como P450Arom, además de flavoproteína\ny el citocromo P 450NADPH reductasa 6. La\nP450Arom se expresa normalmente en las células\nde granulosa ovárica, cuerpo lúteo, placenta,\ntejido adiposo, fibroblastos de piel y cerebro, no\nsiendo detectada en el endometrio normal\n11-13.\nEn la actualidad, el diagnóstico de endometrio-\nsis es establecido por laparoscopia o laparotomía.\nLa biopsia endometrial y la detección del ARN\nmensajero (mRNA) de la enzima P\n450Arom, podría\nser una herramienta importante en la detección de\nesta patología en forma menos invasiva, y contri-\nbuiría, además, a reducir el número de laparosco-\npias, aportando una base racional para iniciar el\ntratamiento médico.\nEl objetivo del presente trabajo fue estudiar el\nmicroambiente estrogénico en endometrios provenien-\ntes de mujeres con endometriosis y compararlos con el\nde mujeres fértiles sanas. Para ello, se determinará la\nexpresión y actividad de la enzima P\n450Arom en\nexplantes endometriales exvivo y en cultivo.\nMATERIALES Y MÉTODOS\nSujetos. El tejido endometrial eutópico fue obteni-\ndo de 23 mujeres sometidas a laparoscopia diag-\nnóstica de endometriosis asociada con dolor\npélvico crónico, dismenorrea severa e infertilidad\nprimaria, y de 20 mujeres eumenorreicas repro-\nductivamente normales (paridad: 3 a 6 hijos)\nsometidas a esterilización tubaria por laparosco-\npia. Todas las mujeres estaban en edad reproduc-\ntiva. Dado que el número de pacientes es\nreducido para una clasificación más exhaustiva de\nla endometriosis, ésta se dividió en endometriosis\nleve (11 pacientes) y severa (12 pacientes) según\nlos criterios de Acosta\n14. Ninguna paciente había\nrecibido terapia endocrina, que incluye análogos\nde GnRH, danazol o anticonceptivos orales en al\nmenos los 6 meses previos a la biopsia endome-\ntrial.\nEste estudio ha sido aprobado por los Comités\nde Ética de la Universidad de Chile y del Hospital\nClínico San Borja Arriarán y las pacientes firmaron\nun consentimiento escrito e informado.\nLas muestras endometriales obtenidas con una\ncánula Pipelle de Cornier desde el cuerpo del\nútero fueron lavadas varias veces con buffer\nfosfato-salino frío (PBS) para remover los glóbulos\nrojos. Posteriormente, fueron cortados en trozos;\nuno de ellos se incluyó en parafina para el estudio\nhistológico, otros se congelaron inmediatamente\nen nitrógeno líquido para estudiar la expresión\ndel mRNA de P\n450Arom o se incubaron por 18 h\npara estudiar la actividad enzimática.\nLas muestras fueron fechadas por un histopa-\ntólogo experimentado según el criterio estableci-\ndo por Noyes\n15, y clasificadas en endometrios de:\nfase proliferativa (días 5-14, n=10) o secretora\n(días 15-26, n=33).\nCultivo de explantes endometriales . Explantes de\ntejido endometrial (20 mg) lavados en PBS fueron\nincubados como se describe previamente con\nalgunas modificaciones\n16. Brevemente, los ex-\nplantes de tejido se incubaron con medio Hanks’\nRev Méd Chile 2004; 132: 1475-1482\nA RTÍCULO  DE\nINVESTIGACIÓN\n\n1477\n(GibcoBRL Life Technology, Bethesda, MD) suple-\nmentado con 2 mmol/L glutamax-I (Invitrogen,\nCarlsbad, CA), solución de insulina-transferrina-\nselenium (ITS, Invitrogen), 0,1% (p/v) de albúmi-\nna sérica de bovino (BSA; Sigma Co., St Louis,\nMO), 26 mmol/L de NaHCO\n3, 25 mmol/L de\nHEPES, aminoácidos, 100 IU/mL de penicilina y 5\nmg/mL de estreptomicina (Sigma) por 18 h a 37°C\nen ausencia (basal) o presencia de testosterona\n(Sigma). Después de la incubación, el medio de\ncultivo fue recogido y guardado a -20 °C para la\ndeterminación de estradiol.\nActividad de la P\n450Arom y concentración de\nestradiol. La actividad de P450Arom fue determina-\nda estudiando la conversión de testosterona a\nestradiol como se describió previamente17. Breve-\nmente, los explantes endometriales fueron incuba-\ndos por 18 h en ausencia (basal) o en presencia\nde testosterona (1 µmol/L). Posteriormente, el\nmedio se recogió y guardó a -20 °C hasta la\ndeterminación de la concentración de estradiol.\nEl estradiol secretado al medio por los explan-\ntes endometriales después de 18 h de cultivo fue\nextraído con etanol:eter (1:1, v/v), evaporada la\nfase orgánica y resuspendido en buffer de reac-\nción; la recuperación del esteroide fue >90%. El\nestradiol fue medido por el radioinmunoensayo\n(RIA) Diagnostic System Lab. (Webster, Texas),\npresentando una sensibilidad de 5,0 pg/ml y CV\nintra-ensayo de 4,1% e inter-ensayo de 6,7%.\nPreparación de ARN, síntesis de ADN complemen-\ntario (cDNA), reacción de polimerización en cade-\nna con transcripción reversa (RT-PCR). El RNA\ntotal fue preparado de endometrios proliferativos\ny secretores congelados como se describió previa-\nmente\n18. Brevemente, el RNA total fue aislado de\nexplantes de tejido endometrial con TRIzol-glicó-\ngeno (Invitrogen); luego, el precipitado purificado\nfue resuspendido en agua tratada con dietilpiro-\ncarbonato. El cDNA fue sintetizado a partir de 2\nµg de RNA total previamente digerido con ADNsa\nI (Fermentas, Vilnius, Lituania) usando partidores\nal azar (Invitrogen) y 200 U de transcriptasa\nreversa ReverAid H Minus M-MuLV (Fermentas)\nsegún indicaciones del proveedor.\nDos µL de cDNA fueron utilizados para ampli-\nficar el gen de P\n450Arom ajustados a un volumen\nde 25 µL agregando buffer PCR que contenía Taq\nADN Polymerasa (0,63 U; Invitrogen), dNTP (0,25\nmmol/L), MgCl2 (1,5 mmol/L) y partidores especí-\nficos (0,4 µmol/L) (sentido (exon 8): 5'-TGGC-\nTACCCAGTGAAAAGG-3' y antisentido (exon 9):\n5'- TCAAAGCACATTTGGTGGAA-3'; 652 pb)\n19. La\nPCR consistió en 35 ciclos de: denaturación (94°C,\n1 min), alineamiento de los partidores (50 °C, 1\nmin) y extensión (72 °C, 1 min) en Thermocycler\nPT-100 (MJ Research Inc. Watertown, MA). Como\ncontrol interno se amplificó ARN ribosomal\n(rRNA) 18S. La semicuantificación de los produc-\ntos de PCR se realizó utilizando el Sistema de\nAnálisis y Documentación de Electroforesis Kodak\n(EDAS 290) y el programa Kodak 1D Image\nAnalysis (Rochester, NY).\nEstadística. Los resultados de estradiol fueron\nnormalizados por mg de tejido húmedo. Los datos\nde las pacientes como edad e índice de masa\ncorporal (IMC) y los resultados en variables conti-\nnuas se expresaron como la media ± error estándar\nde la media. Al comparar proporciones se utilizó\nchi cuadrado. Dada la distribución no gausiana de\nlos datos de acuerdo al test de Kolmogorov, los\nresultados fueron analizados por los test no para-\nmétricos Mann-Whitney U o Kruskal-Wallis. Se\nconsideró estadísticamente significativo a p <0,05.\nRESULTADOS\nLas biopsias de endometrio se obtuvieron de un\nuniverso de 43 mujeres durante la laparoscopia\ndiagnóstica de endometriosis (23 pacientes) o de\nesterilización tubaria (20 controles). La edad de\nambos grupos fue 32,6 ± 5,8 años (rango: 23-41) y\n36,2 ± 4,8 años (rango, 25-43), respectivamente y\nno hubo diferencia estadísticamente significativa.\nEl IMC del grupo de mujeres con endometriosis\nno fue estadísticamente diferente del grupo con-\ntrol (IMC= 24,8 ± 4,3 y 28,2 ± 6,1 kg/m\n2,\nrespectivamente).\nLa expresión de P450Arom se realizó en endo-\nmetrios de 19 mujeres con endometriosis y 17\nmujeres controles, encontrándose que 15/19\n(78,9%) de los endometrios de endometriosis (4/5\nde fase proliferativa y 11/14 de fase secretora) y 5/\n17 (29,4%) de los endometrios del grupo control\n(2/3 de fase proliferativa y 3/14 de fase secretora)\nexpresaron el mRNA de esta enzima durante el\nP450AROM Y MICROANBIENTE ESTROGÉNICO EN ENDOMETRIOS EUTÓPICOS -  MC Johnson et al\nA RTÍCULO  DE\nINVESTIGACIÓN\n\n1478\nEndometriosis\nProliferativo\nSecretor\nControles Endometriosis Cuerpo Lúteo\nCuerpo\nLúteoNormal\nmRNA P450Arom/rRNA 18S\nP450Arom\nrRNA 18S\na\na\n0.4 –\n0.3 –\n0.2 –\n0.1 –\n0 –\n 2\n1.5\n1\n0.5\n0\nciclo menstrual (p=0,0079). Al clasificar a la\nendometriosis en leve y severa se observó que en\nel 86% y 73% de los endometrios se detectó el\nmRNA de P\n450Arom, respectivamente. La intensi-\ndad de banda de los amplificados por PCR fue\nmayor en los endometrios de fase secretora de\nendometriosis con respecto al grupo control\n(p=0,0033), siendo similar en los de fase prolifera-\ntiva (Figura 1). Se utilizó cDNA de cuerpo lúteo\nhumano de fase intermedia como control positivo\nde la expresión de P\n450Arom, siendo 7 veces\nmayor su expresión con respecto al endometrio.\nLos explantes endometriales de endometriosis\nde fase proliferativa secretaron 3,3 veces más\nestradiol al medio que los obtenidos de fase\nsecretora (p=0,030); en tanto, la secreción obteni-\nda en los cultivos endometriales controles de\nambas fases fue constante y similar al obtenido de\nendometrios secretores de las pacientes (Figura\n2A). Al clasificar las endometriosis en leve y\nsevera se observó que la secreción de estradiol se\ntriplica a mayor severidad de la endometriosis\n(0,28 ± 0,07 y 1,085 ± 0,49 pg/mg de tejido,\nrespectivamente, p=0,0596).\nFIGURA 1. Expresión del mRNA de P450Arom en endometrio humano durante el ciclo menstrual. Los partidores son\ncomplementarios a segmentos de los exones 8 y 9 del gen CYP19 (aromatasa) y la reacción se realizó como se\nindica en Materiales y Métodos. Se muestra un gel representativo con amplificados de cDNA endometrial de\nmujeres con endometriosis y controles. Los fragmentos obtenidos corresponden al tamaño esperado. El gráfico\nilustra la amplificación relativa a rRNA 18S. Los valores corresponden al promedio ± error estándar de 17 mujeres\ncontroles (3 de fase proliferativa y 14 de fase secretora), 19 mujeres con endometriosis (5 de fase proliferativa y\n14 de fase secretora) y 1 cuerpo lúteo. ap <0,05 respecto a endometrio control de fase secretora.\nFIGURA 2. Actividad de P 450Arom en cultivos de\nendometrios humanos. Explantes de endometrios fue-\nron incubados en ausencia (basal) (A) y en presencia\nde testosterona (1 µmol/L) (B) por 18 h a 37 °C. En el\nmedio de cultivo se determinó la concentración de\nestradiol. Los resultados están normalizados por mg\nde tejido húmedo y se expresan como promedio ±\nerror estándar y corresponden a endometrios de 11\nmujeres con endometriosis (5 de fase proliferativa y 6\nde fase secretora) y 8 controles (3 de fase proliferativa\ny 5 de fase secretora) (A) y a 4 pacientes con\nendometriosis y a 4 controles (B). \nap <0,05 respecto a\nla fase secretora. bp <0,05 respecto al basal.\nRev Méd Chile 2004; 132: 1475-1482\nA RTÍCULO  DE\nINVESTIGACIÓN\n1.6 –\n1.2 –\n0.8 –\n0.1 –\n0 –\nProliferativo\nSecretor\nBasal\nTestosterona\nSecreción de estradiol\n(pg/mg tejido)Conversión de testosterona\na estradiol (pg/mg tejido)\n3 –\n2 –\n1 –\n0 –\nb\nb\nControl Endometriosis\nControl Endometriosis\na\na\nA\nB\n\n1479\nLa actividad de P 450Arom, estudiada por la\nconversión de testosterona a estradiol y posterior\nsecreción al medio de cultivo, aumentó 6,8 veces\nel estradiol secretado por los explantes endome-\ntriales de endometriosis en presencia de testoste-\nrona, respecto al basal (p=0,0022). En tanto, el\nestradiol sintetizado y secretado al medio de\ncultivo por los endometrios controles en estas\ncondiciones no fue significativamente diferente\n(p=0,1074) (Figura 2B).\nDISCUSIÓN\nLos resultados de esta investigación confirman el\nmicroambiente estrogénico del endometrio eutó-\npico de pacientes con endometriosis, en los cuales\nse estudió la expresión y actividad de la enzima\nP\n450Arom. En forma similar, aunque con menor\nintensidad, algunos endometrios de mujeres con-\ntroles fértiles, también presentaron expresión y\nactividad de esta enzima.\nLas primeras publicaciones indicando la expre-\nsión del mRNA de P\n450Arom en endometrios\nprovenientes de mujeres con endometriosis sugi-\nrieron que esta molécula podría ser un marcador\nbioquímico de esta patología\n8. Investigaciones\nposteriores demostraron un fenómeno similar en\notras patologías dependiente de estrógenos como\nleiomiomas, adenomiosis y cancer endometrial, en\nlas cuales la P\n450Arom puede aumentar el estra-\ndiol endógeno modificando así, el microambiente\nendometrial\n20-22.\nEl hecho que en 20% de los endometrios de\nmujeres con endometriosis, independientemente\nde la fase menstrual, no se detectó el mRNA de\nP\n450Arom, resta validez a esta determinación como\nherramienta diagnóstica. No podemos descartar\nque la expresión de su mRNA sea fluctuante y de\nvida media corta, como tampoco que la RT-PCR\nsea un ensayo suficientemente sensible para detec-\ntarlo en todas las pacientes. Resultados similares\nhan sido reportados por otros autores al estudiar\nlos transcritos (RT-PCR/Southern blot)\n19 o la proteí-\nna (inmunohistoquímica)22 de P450Arom obtenien-\ndo 18% y 8% de falsos negativos, respectivamente.\nAún más, nuestros resultados también mues-\ntran que el 29,4% de los endometrios de mujeres\nsanas fértiles expresaron la P\n450Arom. El reducido\nnúmero de endometrios de fase proliferativa estu-\ndiados no nos permite concluir que esta enzima\nse expresaría mayormente durante este estadio.\nEn forma similar, Dheenadayalu et al\n19 han repor-\ntado la expresión de esta enzima en 25% de los\nendometrios normales obtenidos durante el ciclo\nmenstrual, en controversia con otros autores que\nno detectaron a la enzima P\n450Arom en endome-\ntrios obtenidos de histerectomía por prolapso\nuterino o patología cervical\n8,23. Aunque en el\npresente trabajo, las mujeres control fueron estric-\ntamente seleccionadas cumpliendo los requisitos\nde fertilidad probada y menstruaciones espontá-\nneas cíclicas normales y regulares, la presencia de\nlesiones peritoneales microscópicas podrían no\nhaber sido detectadas durante la salpingoligadura\nlaparoscópica. Por otro lado, endometriosis asin-\ntomática ha sido reportada en alrededor de 4% de\nmujeres sometidas a esterilización tubaria\n24,25.\nEl ambiente estrogénico presente en los endo-\nmetrios eutópicos de pacientes con endometriosis,\nprincipalmente los de fase proliferativa, estaría\ndado en parte, por la actividad local de P\n450Arom.\nEsto explicaría la mayor concentración de estra-\ndiol secretado por los endometrios de estas\npacientes respecto al control. Resultados prelimi-\nnares en homogeneizados de endometrios exvivo\nhan mostrado que la concentración de estradiol\ntambién es mayor en el grupo de endometriosis,\nsugiriendo una mayor síntesis de estradiol, más\nque un aumento de su secreción. A pesar de ello,\nno podemos descartar contaminación sanguínea\ncomo respuesta a la mayor angiogénesis descrita\nen la endometriosis que sería consecuencia al\ndesbalance producido entre la mayor expresión\ndel factor de crecimiento vascular endotelial\n(VEGF) y al regulador negativo de angiogénesis\ntrombospondina-1 (TSP-1)\n26,27.\nNo obstante, explantes de endometrios de\nmujeres con endometriosis convierten testostero-\nna a estradiol sugiriendo que la enzima P450Arom\nexpresada en este tejido presenta actividad local,\nindicando que el mRNA se traduciría a una\nproteína activa capaz de convertir andrógenos en\nestrógenos y que el estradiol detectado correspon-\ndería más a una síntesis de novo que a contamina-\nción sanguínea. Bulun et al\n13 demostraron la\nexpresión del mRNA de la P 450Arom en endome-\ntrio eutópico de mujeres con endometriosis, sin\nembargo, no observaron actividad enzimática.\nEsta discrepancia con nuestros resultados, posi-\nP450AROM Y MICROANBIENTE ESTROGÉNICO EN ENDOMETRIOS EUTÓPICOS -  MC Johnson et al\nA RTÍCULO  DE\nINVESTIGACIÓN\n\n1480\nblemente, es debido al uso de células estromales\nendometriales aisladas; recientemente, ha sido\nlocalizada la proteína de la enzima P\n450Arom en el\ncitoplasma de las células del epitelio glandular y\nmuy levemente en el estroma por inmunohisto-\nquímica\n22,23.\nTradicionalmente, los estrógenos actúan por\nvía endocrina a través de sus receptores nucleares\nespecíficos, a diferencia de lo observado en\npatologías dependientes de estrógenos como cán-\ncer de mama, en donde se han demostrado\nmecanismos paracrinos\n28. En endometriosis y\nleiomiomas, el estradiol actuaría vía intracrina, ya\nque sería sintetizado en el citoplasma de las\ncélulas y actuaría a través de los receptores\npresentes en las mismas células\n29.\nLa endometriosis está fuertemente asociada\ncon infertilidad por mecanismos complejos cuyos\nfactores potenciales pueden ser defectos en la\nfoliculogénesis, implantación embrionaria, y por\nla acción agresiva de los factores inflamatorios\ncontenidos en el fluido peritoneal, entre otros\n30-\n33. En la literatura existe controversia en la\nrespuesta de estas pacientes a la fertilizacion in\nvitro (FIV), encontrándose publicaciones en las\ncuales el número de ovocitos maduros, tasas de\nfertilización, implantación y embarazo son simila-\nres al compararlos con pacientes con infertilidad\npor factor tubario o masculino\n34,35, en tanto en\notras, se reporta que la endometriosis tiene efec-\ntos adversos que afectan estos parámetros de\nmanera importante\n33,36. En nuestro centro se ha\nobservado que las tasas de embarazos son signifi-\ncativamente menores comparadas con pacientes\nque acuden al FIV por otras indicaciones\n37. El\nambiente microestrogénico, como consecuencia\nde la mayor actividad de P\n450Arom en estas\npacientes en comparación a las normales, podría\ncontribuir o estar relacionada con una alteración\nen la receptividad uterina afectando a moléculas\nrelacionadas con la implantación embrionaria.\nRecientemente ha sido publicado que la mayor\nabundancia de mRNA de P\n450Arom en endome-\ntrios de mujeres infértiles estaría asociada con el\nfracaso del FIV 38. La expresión cíclica de los\nreceptores de estradiol y progesterona en el\nendometrio durante el ciclo menstrual y la regula-\nción positiva ejercida por estradiol sobre los\nreceptores de progesterona\n39,40, pudieran estar\nalteradas ante la exposición a un microambiente\nestrogénico como el observado en estas pacientes.\nSe requieren más estudios para esclarecer los\nmecanismos moleculares de regulación de la\nP\n450Arom y explicar así, la baja fertilidad de estas\npacientes y los síntomas menstruales asociados a\nenfermedades benignas dependientes de estradiol.\nREFERENCIAS\n1. W ILLIAMS TJ, P RATT JR. Endometriosis in 1000\nconsecutive celiotomies: incidence and manage-\nment. Am J Obstet Gynecol 1977; 129: 245-50.\n2. M\nAHMOOD TA, TEMPLETON A. Prevalence and gene-\nsis of endometriosis. Human Reprod 1991; 6: 544-\n9.\n3. M URPHY AA. Clinical aspects of endometriosis.\nAnn NY Acad Sci 2002; 955: 1-10.\n4. P RENTICE A. Endometriosis. BMJ 2001; 323: 93-5.\n5. V IGNALI M, I NFANTINO M, M ATRONE R, C HIODO I,\nSOMIGLIANA E, B USACCA M ET AL. Endometriosis:\nnovel etiopathogenetic concepts and clinical\nperspectives. Fertil Steril 2002; 78: 665-78.\n6. B ULUN SE, Z EITOUN KM, T AKAYAMA K, S IMPSON ER,\nSASANO H. Aromatase as a therapeutic target in\nendometriosis. TEM 2000; 11: 22-7.\n7. W OOD AJJ. Treatment of endometriosis. N Engl J\nMed 2001; 345: 266-75.\n8. N OBLE LS, SIMPSON E, JOHNS A, BULUN SE. Aromatase\nexpression in endometriosis. J Clin Endocrinol\nMetab 1996; 81: 174-9.\n9. K ITAWAKI J, KOSHIBA H, ISHIHARA H, KUSUKI I, TSUKA-\nMOTO K, HONJO H. Progesterone induction of 17ß-\nhydroxysteroid dehydrogenase type 2 during the\nsecretory phase occurs in the endometrium of\nestrogen-dependent bening diseases but not in\nnormal endometrium. J Clin Endocrinol Metab\n2000; 85: 3292-6.\n10. G\nIUDICE LC, T ELLES TL, L OBO S, K AO L. The\nmolecular basis for implantation failure in endo-\nmetriosis. Ann NY Acad Sci 2002; 955: 252-64.\n11. SEBASTIAN S, BULUN SE. A highly complex organiza-\ntion of the regulatory region of the human CYP19\n(aromatase) gene revealed by the human genome\nRev Méd Chile 2004; 132: 1475-1482\nA RTÍCULO  DE\nINVESTIGACIÓN\n\n1481\nproject. J Clin Endocrinol Metab 2001; 86: 4600-2.\n12. HARADA N, U TSUMI T, T AKAGI Y. Tissue-specific of\nthe human aromatase cytochrome P- 450 gene by\nalternative use of multiple exons 1 and promoters\nand switching of tissue-specific exons 1 in carci-\nnogenesi. Proc Natl Acad Sci 1993; 90: 11312-6.\n13. B\nULUN SE, MAHENDROO MS, SIMPSON ER. Polymerase\nchain reaction amplification fails to detect aroma-\ntase cytochrome P\n450 transcripts in normal human\nendometrium or decidua. JCEM 1993; 76: 1458-63.\n14. ACOSTA AA, BUTTRAM VC, FRANKLIN RR, BESCH PK. A\nproposed classification of pelvic endometriosis.\nObstet Gynecol 1973; 42: 19-25.\n15. N\nOYES RW, HERTIG AT, ROCK J. Dating the endome-\ntrial biopsy. Fertil Steril 1950; 1: 3-25.\n16. JOHNSON MC, M ALIQUEO M, B ORIC MA, V ILLAVICENCIO\nA, VANTMAN D, VEGA M. Differential in vitro actions\nof nitric oxide on human endometrial cell survi-\nval. Fertil Steril 2004; 81: 176-84.\n17. J\nOHNSON MC, D ÍAZ HA, S TOCCO C, P ALOMINO A,\nDEVOTO L, V EGA M. Antisteroidogenic action of\nnitric oxide on human corpus luteum in vitro .\nEndocrine 1999; 11: 31-6.\n18. CASTRO A, J OHNSON MC, A NIDO M, C ORTÍNEZ A,\nGABLER F, VEGA M. Role of nitric oxide and Bcl-2\nfamily genes in the regulation of endometrial\napoptosis. Fertil Steril 2002; 78: 587-95.\n19. D\nHEENADAYALU K, MAK I, GORDTS S, CAMPO R, HIGHAM\nJ, PUTTEMAMNS P ET AL. Aromatase P450 messenger\nRNA expression in eutopic endometrium is not a\nspecific marker for pelvic endometriosis. Fertil\nSteril 2002; 78: 825-9.\n20. B\nULUN SE, SIMPSON ER, WORD RA. Expression of the\nCYP19 gene and its product aromatase cytochro-\nme P450 in human uterine leiomyoma tissues and\ncells in culture. J Clin Endocrinol Metab 1994; 78:\n736-43.\n21. ISHIHARA H, KITAWAKI J, KADO N, KOSHIBA H, FUSHIKI\nS, H ONJO H. Gonadotropin-releasing hormone\nagonist and danazol normalize aromatase cyto-\nchrome P450 expression in eutopic endometrium\nfrom women with endometriosis, adenomyosis,\nor leiomyomas. Fertil Steril 2003; 79 (Suppl 1):\n735-42.\n22. K\nITAWAKI J, K USUKI I, K OSHIBA H, T SUKAMOTO K,\nFUSHIKI S, HONJO H. Detection of aromatase cyto-\nchrome P450 in endometrial biopsy specimens as\na diagnostic test for endometriosis. Fertil Steril\n1999; 72: 1100-6.\n23. KITAWAKI J, NOGUCHI T, AMATSU T, MAEDA K, TSUKAMO-\nTO K, YAMAMOTO T ET AL. Expression of aromatase\ncytochrome P450 protein and messenger ribonu-\ncleic acid in human endometriotic and adenom-\nyotic tissues but not in normal endometrium. Biol\nReprod 1997; 57: 514-9.\n24. CRAMER DW, M ISSMER SA. The epidemiology of\nendometriosis. Ann NY Acad Sci 2002; 955: 11-22.\n25. MOEN MH, S TOKSTAD T. A long-term follow-up\nstudy of women with asymptomatic endometrio-\nsis diagnosed incidentally at sterilization. Fertil\nSteril 2002; 78: 773-6.\n26. TAN X-J, LANG J-H, LIU D-Y, SHEN K, LENG J-H, ZHU\nL. Expression of vascular endothelial growth\nfactor and thrombospondin-1 mRNA in patients\nwith endometriosis. Fertil Steril 2002; 78: 148-53.\n27. D\nONNEZ J, S MOES P, G ILLEROT S, C ASANAS-ROU F,\nNISOLLE M. Vascular endothelial growth factor\n(VEGF) in endometriosis. Hum Reprod 1998; 13:\n1686-90.\n28. BULUN SE, P RICE TM, A ITKEN J, M AHENDROO MS,\nSIMPSON ER. A Link between breast cancer and\nlocal estrogen biosynthesis suggested by quantifi-\ncation of breast adipose tissue aromatase cyto-\nchrome P\n450 transcripts using competitive\npolymerase chain reaction after reverse transcrip-\ntion. J Clin Endocrinol Metab 1993; 77: 1622-8.\n29. B\nULUN SE, Y ANG S, F ANG Z, G URATES B, T AMURA M,\nSEBASTIAN S. Estrogen production and metabolism\nin endometriosis. Ann NY Acad Sci 2002; 955: 75-\n85.\n30. GARCÍA-VELASCO JA, ARICI A. Is the endometrium or\noocyte/embryo affected in endometriosis? Hu-\nman Reprod 1999; 14 (Suppl 2): 77-89.\n31. LESSEY B. Implantation defects in infertile women\nwith endometriosis. Ann NY Acad Sci 2002; 955:\n265-80.\n32. MULAYIM N, A RICI A. The relevance of the perito-\nneal fluid in endometriosis-associated infertility.\nHuman Reprod 1999; 14 (Suppl 2): 67-76.\n33. MAHUTTE NG, A RICI A. New advances in the\nunderstanding of endometriosis related infertility.\nJ Reprod Immunol 2002; 55: 73-83.\n34. O\nLIVENNES F, FELDBERG D, L IU HC, C OHEN J, M OY F,\nTOSENWAKS Z. Endometriosis: a stage analysis the\nrole of in vitro fertilization. Fertil Steril 1995; 64:\n392-8.\n35. GIBBONS WE. Management of endometriosis in\nfertility patients. Fertil Steril 2004; 81: 1204-5.\nP450AROM Y MICROANBIENTE ESTROGÉNICO EN ENDOMETRIOS EUTÓPICOS -  MC Johnson et al\nA RTÍCULO  DE\nINVESTIGACIÓN\n\n1482\n36. BARNHART K, DUNSMOOR-SU R, COUTIFARIS C. Effect of\nendometriosis on in vitro fertilization. Fertil Steril\n2004; 77: 1148-55.\n37. HUNEEUS A, ALBA JF, DEVOTO L, SOTO E, VANTMAN D,\nGUNTHER A ET AL. Resultados en tratamientos\nconvencionales de infertilidad. Rev Chil Obstet\nGinecol 2000; 65: 255-61.\n38. BROSENS J, VERHOEVEN H, CAMPO R, GIANAROLI L, GORDTS\nS, HAZEKAMP J ET AL. High endometrial aromatase P450\nmRNA expression is associated with poor IVF\noutcome. Human Reprod 2004; 19: 352-6.\n39. L\nESSEY BA, K ILLAM AP, M ETZGER DA, H ANEY AF,\nGREENE GL, M CCARTY KS. Immunohistochemical\nanalysis of human uterine estrogen and progeste-\nrone receptors throughout the menstrual cycle. J\nClin Endocrinol Metab 1988; 67: 334-9.\n40. M\nESIANO S, C HAN EC, F ITTER JT, K WEK K, Y EO G,\nSMITH R. Progesterone withdrawal and estrogen\nactivation in human parturition are coordinated\nby progesterone receptor A expression in the\nmyometrium. J Clin Endocrinol Metab 2002; 87:\n2924-30.\nAgradecimientos\nLos autores agradecen al Dr. Juan Carlos Barros\n(Hospital Clínico San Borja Arriarán, Servicio de\nSalud) por su rol de reclutar mujeres del grupo\ncontrol y en el procedimiento quirúrgico utilizado.\nTambién agradecen a las mujeres que donaron tejido\npara este estudio.\nRev Méd Chile 2004; 132: 1475-1482\nA RTÍCULO  DE\nINVESTIGACIÓN","source_license":"CC0","license_restricted":false}