{"paper_id":"27389f46-6375-41a4-96fa-6197a1d17c06","body_text":"대한한방부인과학회지\nJ Korean Obstet Gynecol. VOL.27 NO.1 : 101-119 (2014)\nhttp://dx.doi.org/10.15204/jkobgy2014.27.1.101\n101\n紫河車 藥鍼이 실험적으로 유발된 흰쥐의 \n자궁내막증에 미치는 영향\n1세명대학교 한의학과 한방부인과교실, 2세명대학교 한의학과 사상체질의학교실\n유영기1, 김형준1, 신미란2, 이동녕1\nABSTRACT\nEffects of Hominis Placenta Pharmacopuncture Therapy \non the Experimentally-induced Endometriosis in the Rats\nYung-Ki Yoo1, Hyung-Jun Kim1, Mi-Ran Sin2, Dong-Nyung Lee1\n1Dept. of Oriental Gynecology, Se-Myung University\n2Dept. of Sasang Constitutional, Se-Myung University\nObjectives: This study was performed to investigate the effects of Hominis Placenta \npharmacopuncture (HPP) therapy on the experimentally-induced endometriosis in the rats.\nMaterials and Methods: Endometriosis was induced in rats by autotransplanting \nuterine tissue to the peritoneum and divided them into three groups: (1) sham-operated \ngroup (n=8), (2) surgically induced endometriosis and untreated control group \n(n=8), (3) surgically induced endometriosis and HPP treated group. Sham-operated \ngroup and control group were inject with normal saline once a every other day for \n30days, while treated group was injected with HPP extract once a every other day \nfor same duration. Injected point of HPP and normal saline were subcutaneous tissue \nat Gwanwon (CV4) acupoint. Then we measured the body weight, the volume of \nendometriotic implants, the weigh of uterus and ovaries, and investigated the \nconcentration of cytokines (MCP-1, TNF-α) in peritoneal fluids. Histopathology, \nimmunohistochemisty for COX-2 and VEGF, and histochemistry for mast cell in \ntransplanted uterine tissue were performed.\nResults: The volume (mm2) of endometriotic implants in HPP treated group \n(55.4±41.6) was significantly decreased (p<0.01) compared with control group (140±66.1). \nAnd the concentration (pg/ml) of MCP-1 in peritoneal fluids in HPP treated group \n(1117.6±60.5) was significantly decreased (p<0.01) compared with control group \n(1446.2±280.3). The concentration (pg/ml) of TNF-α in peritoneal fluids in HPP treated \ngroup (80.6±31.4) was decreased (p<0.01) compared with control group (145.3±86.9). \nHistopathologically, proliferation of endometriotic epithelia, infiltration of inflammatory \ncell and angiogenesis in transplanted uterine tissue of HPP treated group were \nweakly observed than those of control group. The COX-2 expression in endometrial, \nepithelial and stromal cells in transplanted uterine tissue of HPP treated group was \ndecreased compared with control group. The VEGF expression of endometriotic epithelia, \nneovascular endothelia and stromal cell in transplanted uterine tissue of HPP treated \ngroup were weakly observed than those of control goup.\nConclusions: HPP is effect on Endometriosis of rats by Experimentally-induced.\nKey Words: Hominis Placenta Pharmacopuncture, Endometriosis, MCP-1 TNF-α, \nCOX-2, VEGF\n7)\nCorresponding author(Dong-Nyung Lee) : Se-Myung University Chung-Ju Oriental Medical Hospital, \nBong-Bang-dong, Chung-Ju-si, Chungcheongbuk-do, Korea\nTel : 043-841-1733    E-mail : handr88@korea.com\n\n紫河車 藥鍼이 실험적으로 유발된 흰쥐의 자궁내막증에 미치는 영향\n102\nⅠ. 서  론\n자궁내막증은 자궁내막조직(선과 기질)\n이 자궁강 이외의 부위에 위치하여1), 월\n경곤란증, 성교통, 배변통 등과 함께 만성 \n골반통을 초래하는 질환으로, 종종 황체\n기 출혈과 불임을 유발하고2), 만성화되거\n나 침윤성으로 발전할 수 있어 조기진단과 \n함께 적절한 치료가 필요한 질환이다3,4).\n자궁내막증의 원인은 월경역류설과 함\n께, 자연 발생적 또는 유도된 체강상피\n의 화생에 의해 발생한다는 증거도 있으\n며, 유전적 소인, 환경적 요인, 면역학적 \n및 내분비적 기능의 변화 등도 중요한 \n역할을 하는 것으로 알려져 있다\n5).\n서양의학적인 치료는 주로 진통제와 \n함께 혈중 에스트로겐을 억제하는 약물\n치료를 하고 있지만 경우에 따라 골반강\n내 유착된 내막조직을 제거하는 외과적 \n치료를 하고, 이 외에 기대요법 및 병합\n요법 등을 하고 있다\n1). 그러나 수술은 재\n발이 잦고 약물치료는 체중증가, 유방축\n소, 다모증, 위축성질염, 질출혈, 질건조\n증, 안면홍조, 여드름, 골다공증, 우울증, \n피로 등의 부작용 등을 나타내며\n6,7), 또한 \n약물치료로 무월경 상태가 되면 환자는 \n불임에 대한 두려움도 가질 수 있다8).\n자궁내막증 치료와 관련된 한의학 연\n구로는 活血化瘀작용하는 약물을 이용한 \n연구10-13), 항염증 및 항종양 작용이 있는 \n약물을 이용한 연구14-16) 그리고, 면역감\n시기능과 밀접한 관계가 있다9)는 점에서 \n八珍湯17), 黃 芪18) 등이 연구되고 있다. \n또한 치료방법으로는 주로 약물복용을 \n전제로 한 복합처방 또는 단일 약물에 \n대한 연구가 많지만, 보류관장법\n14), 약침\n19,20)처럼 다양한 치료법이 시도되고 있\n다. 그런데 보류관장법은 실제 임상에 \n적용하기 힘든 치료법이지만 약침은 임\n상적 활용면에서 좋은 점이 있을 것으로 \n사료된다.\n이에 저자들은 태반에서 추출한 紫河\n車\n21)가 補益藥으로 補氣･養血･益精･治虛\n損 등 인체의 저항력과 면역력을 향상시\n키는 효능이 있고, 임상에서 다양한 증\n상에 藥鍼으로 많이 활용되고 있기에\n22-25), 자궁내막증에 미치는 영향을 확인\n하기 위하여 본 연구를 실시하였다. \n자궁내막증에 미치는 영향을 조사하기 \n위해, 자궁의 자가이식법으로 자궁내막\n증을 유발된 흰쥐를 대조군과 紫河車 藥\n鍼을 투여한 처치군으로 분류하고, 각 \n군의 체중, 이식자궁의 체적, 자궁과 난소\n의 중량, 복강 세척액내 cytokine(MCP-1, \nTNF-\nα)의 함량을 측정하고, 병리조직학\n적검사, 면역조직학적검사(COX-2, VEGF), \n비만세포 조직학적 검사를 실시한 결과, \n紫河車 藥鍼이 자궁내막증 발생 억제에 \n미치는 기전을 확인하고, 유의한 결과를 \n얻었기에 보고하는 바이다.\nⅡ. 재료 및 방법\n1. 실험동물 및 자궁내막증 유발\n8주령의 SPF 암컷 Sprague-Dawley계 \n흰쥐(나라바이오텍, 한국)를 구입하여 세\n명대학교 청정동물사육실(온도 23±1℃, 습\n도 55±5%, 명암주기 12시간)에서 일주일\n간 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 전 실\n험기간동안 사료(제일제당, 한국)와 음수\n는 충분한 양을 제공하였다. 본 동물실\n험은 세명대학교 동물실험윤리위원회의 \n\nJ Korean Obstet Gynecol Vol.27 No.1 February 2014\n103\n승인(smeac 11-06-02)하에 실시되었다.\n실험적 자궁내막증은 Vernon and Wilson26)\n의 방법에 준하여 자궁자가이식수술을 \n실시하여 유발시켰다. 실험개시일 오전 \n8시에 흰쥐의 질 도말표본(vaginal smear)\n을 만들어 Giemsa 염색하고, 유핵상피세\n포가 주로 관찰되는 발정전기인 개체를 \n선별하였다(Fig. 1). Zoletil 50(Virbac Lab., \nFrance) 0.2 ml을 복강주사하여 마취시\n킨 후 개복수술하고 자궁각(uterine horn)\n을 기준으로 우측 자궁을 고리모양으로 \n묶고(Fig. 2) 자궁의 일부를 적출하였다. \n적출된 자궁조직을 37℃ Creb's sol.에 담\n근 상태에서 종축으로 절단하고 4×4 mm \n크기의 절편을 만들었다. 절편의 자궁외\n막이 복벽으로 향하도록 좌측복벽에 위\n치시키고 catgut(B. Braun Surgical Sdn. \nBhd., Malaysia)으로 자궁조직의 중앙부\n위를 1회 결찰 하여(Fig. 3) 자궁내막증\n을 유발시켰다.\nFig. 1. Cytology of vaginal smear of rat. \nNucleated epithelia (arrows) are major cell type \nat proestrus stage. Giemsa's stain, bar=20 μm.\nFig. 2. Surgical procedure of partial right \nuterectomy. \nA portion of right uterine horn (arrow) was \nligated and taked out. RU : right uterine horn.\nFig. 3. Surgical procedure of auto- \ntransplantation of uterus.\nFragment (4×4 mm) of ectomized right uterus \n(arrow) was transplanted to left abdominal \nwall by single tie of catgut suture.\n2. 약침액 및 약침액의 처치\n약침액은 100g의 紫河車를 둥근 flask\n에 2ℓ의 증류수와 함께 넣어 수증기 증\n류법으로 1600ml의 증류액을 만들고 냉\n각, 여과하고, 이 여과액을 100ml로 감압, \n농축한 후 pH METER를 이용해 pH 7\n로 조정해 멸균과정을 거쳐 냉장 보관하\n\n紫河車 藥鍼이 실험적으로 유발된 흰쥐의 자궁내막증에 미치는 영향\n104\n였다. \n紫河車 藥鍼은 사람의 關元穴(CV4)에 \n해당하는 좌우 상전장골극(anterior superior \niliac spine) 사이의 정중 복부 피하에 주\n사하였다.\n3. 실험군의 분류\n아래와 같이 실험군을 분류하고 각 군\n당 8마리의 흰쥐를 배정하였다. 음성군 \n및 대조군에는 생리식염수 0.2 ml를, 처\n치군에는 紫河車 藥鍼 0.2 ml를 2일 간\n격으로 30일간 15회 피하 주입하였다.\n음성군(sham group) : 우측 자궁의 \n일부를 적출하고, 이식술은 실시하지 않\n고 생리식염수를 처치한 군.\n대조군(control group) : 자궁의 자가\n이식술을 실시하여 자궁내막증을 유발하\n고 생리식염수를 처치한 군.\n처치군(treated group) : 자궁의 자가\n이식술을 실시하여 자궁내막증을 유발하\n고 紫河車 藥鍼액을 처치한 군.\n4. 체중의 측정\n실험 개시일(0), 10, 20, 종료일(30일)\n에 모든 개체의 체중을 측정하였다.\n5. 이식자궁조직의 체적(volume) 측정\n이식자궁조직의 크기 차이는 그 체적\n으로 평가하였다. 실험종료일에 부검하\n여 이식자궁조직 및 주변의 복벽을 넓게 \n적출하여 이식자궁조직의 크기를 digital \ncalipper(Mitutoyo, CD-15CP, Japan)로 \n장경 및 단경을 측정하고 아래와 같은 \n공식으로 그 체적을 구하였다.\n체적(volume)= 장경×단경×단경\n2\n6. 자궁 및 난소 무게의 측정\n실험종료일에 부검하여 좌측 자궁 및 \n양측 난소를 적출하고 주변의 지방조직 \n및 결합조직을 세밀하게 분리한 후 무게\n를 측정하였다.\n7. 복막강 세척액내 cytokine 함량 측정\n실험종료일에 흰쥐를 가볍게 ether로 \n마취시키고 심장을 통해서 전혈을 채취\n하고 원심하여 혈청을 분리하였다. 전혈\n을 채취한 후 복강내로 동일 개체에서 \n채취한 분리 복혈청 0.2 ml를 주입하고 \n복강을 노출시켰다. 멸균 복막대봉으로 \n복막강이 충분히 세척되도록 복강장기를 \n저은 다음 흡입관을 이용하여 복막강 세\n척액을 회수하였다. 회수된 복막강 세척\n액은 검사 전까지 -70℃에 보관하였다.\n1) Monocyte Chemoattractant Protein-1 \n(MCP-1) 함량 측정\n복막강 세척액내 MCP-1 함량은 Enzyme \n-Linked ImmunoSorbent Assay(ELISA) \nkit(Pierce, ERMCP1, USA)로 측정하였\n다. 표준액 및 검액은 1시간, biotinylated \nantibody reagent는 1시간, streptavidin-HRP \nsolution은 30분간 반응시켰다. 각 반응\n사이에는 0.05M PBS(pH 7.5) 용액으로 \n충분하게 세척하였다. 최종적으로 TMB \nsubstrate solution을 30분간 반응시켜 발\n색시킨 후 stop solution으로 반응을 정지\n시켰으며, ELISA 판독기(Molecular Devices, \nE10514, USA)로 450 nm에서 흡광도를 \n측정하였다. \n6단계의 MCP-1 표준액(1500, 600, 240, \n96, 38, 0 pg/ml)에서 측정된 흡광도로부\n터 다음과 같은 직선회귀방정식이 구해\n졌으며, 검액의 흡광도를 이 방정식에 적\n용하여 MCP-1의 함량을 구하였다. \n\nJ Korean Obstet Gynecol Vol.27 No.1 February 2014\n105\nMCP-1 함량=(검액의 흡광도×1431)+94\n2) Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α) \n함량측정\n복막강 세척액내 TNF-α 함량은 ELISA \nkit로 측정하였다. 표준액 및 검액은 1시\n간, biotinylated antibody reagent는 1시\n간, streptavidin-HRP solution은 30분간 \n반응시켰다. 각 반응사이에는 0.05M PBS \n(pH 7.5) 용액으로 충분하게 세척하였다. \n최종적으로 TMB substrate solution을 \n30분간 반응시켜 발색시킨 후 stop solution\n으로 반응을 정지시켰으며, ELISA 판독\n기(Molecular Devices, E10514, USA)로 \n450 nm에서 흡광도를 측정하였다. \n6단계의 TNF-\nα 표준액(2500, 833, 278, \n93, 31, 0 pg/ml)에서 측정된 흡광도로부\n터 다음과 같은 직선회귀방정식이 구해\n졌으며, 검액의 흡광도를 이 방정식에 \n적용하여 TNF-\nα의 함량을 구하였다. \nTNF-α 함량=(검액의 흡광도×755)-32\n8. 병리조직학적 검사\n실험 종료일에 모든 개체를 부검하여 \n얻은 이식자궁조직, 좌측 자궁 및 좌측 \n난소를 10% 중성 포르말린에 2일간 고정\n하였다. 고정된 조직을 알콜탈수과정을 거\n쳐서 파라핀 포매하고 5 \nμm의 박절편을 \n제작하였다. 제작된 박절편을 Hematoxylin \n-Eosin 염색하여 광학현미경으로 병리조\n직학적 소견을 관찰하였다.\n9. COX-2 면역조직화학적 검사\n이식자궁조직의 박절편을 poly-L-lysine \n(Sigma, USA)으로 처리된 슬라이드에 \n부착하여 ABC 법으로 COX-2 면역조직\n화학 염색을 다음과 같이 실시하였다.\n탈파리핀과정과 함수과정을 거친 이식\n자궁조직 절편을 protease K(Roche, \nGermany) 용액으로 20분간 처리하여 조\n직내 항원을 부활시켰다. 내인성 과산화 \n반응을 억제하기 위해서 3% H\n2O2 용액\n에 60분간 처리한후 0.5M PBS(pH 7.5)\n로 3회 세척하였다. 비특이 반응을 억제\n하기 위해서 0.3% Triton-X100, 1% BSA \n및 3% normal rabbit serum이 함유된 \nPBS로 30분간 처리한 후 1:200으로 희\n석된 goat polyclonal anti-COX-2(Santa \nCruz Biotechnology, USA)를 냉장상태\n에서 24시간 반응시켰다. 조직을 PBS로 3회 \n세척한 후 biotinylated anti-goat antibody \n및 avidin-biotin peroxidase complex(Vector \nLaboratories, USA)를 각각 차례로 1시\n간씩 반응시키고 diaminobenzidine(Sigma, \nUSA)으로 발색시켜 광학현미경으로 이\n식자궁조직의 점막상피세포 및 간질에 \n침윤된 세포에서의 양성반응 정도를 관\n찰하였다.\n10. Vascular Endothelial Growth Factor \n(VEGF)의 발현검사\n이식자궁조직의 박절편을 poly-L-lysine\n으로 처리된 슬라이드에 부착하여 ABC \n법으로 VEGF 면역조직화학 염색을 다\n음과 같이 실시하였다.\n탈파리핀과 함수과정을 거친 이식자궁\n조직 절편을 protease K 용액으로 20분\n간을 처리하여 조직내 항원을 부활시켰\n다. 내인성 과산화 반응을 억제하기 위\n해서 3% H\n2O2 용액에 60분간 처리한 후 \n0.5M PBS(pH 7.5)로 3회 세척하였다. \n비 특 이  반 응 을  억 제 하 기  위 해 서  0 . 3 %  \nTriton-X100, 1% BSA 및 3% normal \nhorse serum이 함유된 PBS로 30분간 처리\n한 후 1:200으로 희석된 mouse monoclonal \n\n紫河車 藥鍼이 실험적으로 유발된 흰쥐의 자궁내막증에 미치는 영향\n106\nanti-VEGF(Santa Cruz Biotechnology, \nUSA)를 냉장상태에서 24시간 반응시켰다. \n조직을 PBS로 3회 세척한 후 biotinylated \nanti-mouse antibody 및 avidin-biotin \nperoxidase complex를 각각 차례로 1시간\n씩 반응시키고 diaminobenzidine으로 발\n색시켜 광학현미경으로 이식자궁조직에서 \n증식된 신생혈관 및 간질에 침윤된 세포\n에서의 양성반응 정도를 관찰하였다.\n11. 비만세포 수의 측정\n탈파리핀과 함수과정을 거친 이식자궁\n조직 절편을 Toludine Blue 염색법으로 \n비만세포를 표지하고 이식자궁조직에 침\n윤된 비만세포수를 모두 계수하였다.\n12. 통계처리\n측정된 항목의 결과에 대한 통계는 \nSPSS(SPSS 10.1 for Windows, USA)를 \n이용하여 student's t-test를 실시하여 검\n증하였다.\nⅢ. 결  과\n1. 체중의 차이\n음성군 및 대조군 모두에서 실험개시\n일 부터 실험종료일 까지 완만한 체중의 \n증가가 있었으며, 군간에 유의성 있는 \n차이는 없었다. 처치군은 대조군에 비해\n서 실험 10일에 유의성 있게 체중이 높\n았으나 그 이후부터 실험종료일까지 유\n의성 있는 차이는 없었다(Table 1).\nGroup Body weight (g)\n0 10 20 30 days\nSham\n(n=8) 208±6* 243±9 256±8 268±9\nControl\n(n=8) 211±3 239 ±7 254 ±3 269 ±5\nTreated\n(n=8) 209±5 248 ±8# 259±9 272 ±10\n* : data expressed as Mean±S.D.\nSham : right partial uterectomy and saline \npharmacopuncture therapy\nControl : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and saline pharmacopuncture \ntherapy\nTreated : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and Hominis Placenta \nPharmacopuncture Therapy\n# : Statistically significant compared with \ncontrol group (# : p＜0.05)\nTable 1. Effects of Hominis Placenta \nPharmacopuncture Therapy on the Body \nWeight of Rats with Experimentally- \ninduced Endometriosis\n2. 이식 자궁조직의 육안 소견\n대조군 및 처치군의 모든 예에서 이식\n자궁조직은 좌측 복벽에 비교적 둥근 형\n태로 증식되어 있었다. \n대조군의 8예 중 1예는 황회색의 내용\n물이 차 있는 덩어리 형태로 관찰되었으\n며(Fig. 4a), 7예는 장액성 물질이 차 있\n는 낭포상 구조를 하고 있었다(Fig. 4b). \n처치군의 이식자궁조직은 대조군에 비해\n서 전반적으로 작은 크기로 관찰되었으며 \n(Fig. 5a), 8예 중 7예는 장액이 차 있는 \n낭포상의 형태를, 그리고 1예는 치밀한 \n덩어리 형태로 증식되어 있었다(Fig. 5b).\n\nJ Korean Obstet Gynecol Vol.27 No.1 February 2014\n107\nFig. 4. Gross Structure of Transplanted \nUterine Tissue of Control Group. \n(4a) : Presentative case, (4b) : All cases (formalin \nfixed) of control group. Note cystic development \nof the implanted tissues.\nFig. 5. Gross Structure of Transplanted \nUterine Tissue of Treated Group (\nHominis \nPlacenta Pharmacopuncture Therapy). \n(5a) : Presentative case, (5b) : All cases (formalin \nfixed) of pharmacopuncture with \nJahageo group. \nCompare the sizes with three of Fig. 4b.\n3. 이식자궁조직 체적(volume)의 차이\n실험종료일에 측정한 이식자궁조직의 \n체적은 처치군이 대조군에 비해서 유의\n성 있게 작았다(Table 2). \nGroup Volume of Transplanted\nUterine Tissue (mm3)\nControl (n=8) 140.2±66.1*\nTreated (n=8) 55.4 ±41.6##\n* : data expressed as Mean±S.D.\nControl : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and saline pharmacopuncture \ntherapy\nTreated : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and Hominis Placenta \nPharmacopuncture therapy\n## : Statistically significant compared with \ncontrol group (## : p＜0.01)\nTable 2. Effects of Hominis Placenta \nPharmacopuncture Therapy on the Volume \nof Transplantated Uterine Tissue in Rats \nwith Experimentally-induced Endometriotiosis\n4. 자궁 및 난소 중량의 차이\n실험종료일에 측정한 좌측 자궁의 중량\n은 대조군이 음성군에 비해서 낮았으나, \n군간에 유의성 있는 차이는 없었다. 또한 \n처치군은 대조군에 비해서 높았으나, 군\n간에 유의성 있는 차이는 없었다(Table 3).\n난소의 중량은 대조군이 음성군에 비\n해서 낮았으나, 군간에 유의성 있는 차\n이는 없었다. 또한 처치군은 대조군에 \n비해서 높았으나 군간에 유의성 있는 차\n이는 없었다(Table 3).\n5. Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α) \n함량의 차이\n실험종료일에 측정한 복막강세척액내 \nTNF-α의 함량은 대조군이 음성군에 비해\n서 유의성 있게 높았다. 처치군의 TNF-α\n의 함량은 대조군에 비해서 현저히 낮았\n\n紫河車 藥鍼이 실험적으로 유발된 흰쥐의 자궁내막증에 미치는 영향\n108\n으나 군간에 유의성 있는 차이는 관찰되\n지 않았다(Table 4). \nGroup Left Uterus\n(mg)\nOvaries\n(mg)\nSham (n=8) 171±28* 88±14\nControl (n=8) 161 ±27 79 ±7\nTreated (n=8) 177 ±28 86 ±7\n* : data expressed as Mean±S.D.\nSham : right partial uterectomy and saline \npharmacopuncture therapy\nControl : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and saline pharmacopuncture \ntherapy\nTreated : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and Hominis Placenta \nPharmacopuncture therapy\nTable 3. Effects of Hominis Placenta \nPharmacopuncture Therapy on the Weight \nof Left Uterus and Ovaries in Rats with \nExperimentally-induced Endometriosis\nGroup Tumor Necrosis \nFactor-α (pg/ml)\nSham (n=8) 39.3±25.3*\nControl (n=8) 145.3 ±86.9##\nTreated (n=8) 80.6 ±31.4\n* : data expressed as Mean±S.D.\nSham : right partial uterectomy and saline \npharmacopuncture therapy\nControl : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and saline pharmacopuncture \ntherapy\nTreated : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and Hominis Placenta \nPharmacopuncture therapy\n## : Statistically significant compared with \nsham group (## : p＜0.01)\nTable 4. Effects of Hominis Placenta \nPharmacopuncture Therapy on the TNF-α \nValues in Peritoneal Fluids of Rats with \nExperimentally-induced Endometriosis\n6. Monocyte Chemoattractant Protein-1 \n(MCP-1) 함량의 차이\n실험 종료일에 측정한 복막강세척액내 \nMCP-1 함량은 대조군이 음성군에 비해\n서 유의성 있게 높았다. 처치군의 MCP-1 \n함량은 대조군에 비해서 유의성 있게 낮\n았다(Table 5).\nGroup Monocyte Chemoattractant \nProtein-1 (pg/ml)\nSham (n=8) 714.7±216.8*\nControl (n=8) 1446.2 ±280.3###\nTreated (n=8) 1117.6 ±60.5##\n* : data expressed as Mean±S.D.\nSham : right partial uterectomy and saline \npharmacopuncture therapy\nControl : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and saline pharmacopuncture \ntherapy\nTreated : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and Hominis Placenta \nPharmacopuncture therapy\n### : Statistically significant compared with \nsham group (### : p＜0.001)\n## : Statistically significant compared with \ncontrol group (## : p＜0.01)\nTable 5. Effects of Hominis Placenta \nPharmacopuncture Therapy on the MCP-1 \nValues in Peritoneal Fluids of Rats with \nExperimentally-induced Endometriosis\n7. 병리조직학적 소견\n1) 이식자궁조직\n대조군의 모든 예에서 이식자궁조직은 \n낭(cyst)의 형태로 증식되어 있었다. 단\n층 또는 중층으로 이루어진 자궁내막, \n자궁중막 및 자궁외막의 모든 구조가 관\n찰되었다. 대조군 8례 중 2례는 낭내에 \n호중구가 가득 차 있었으며 나머지 6예\n는 소수의 호중구 및 탈락상피세포가 관\n찰되었다. 대조군 8례중 5례는 내막의 \n기질내에 자궁선이 발달되어 있었으며, \n3례에서는 기질의 증식이 두드러지게 관\n찰되었다. 대조군의 모든 예에서 이식자\n궁조직과 복벽사이의 유착부위에는 결합\n조직세포 및 신생모세혈관의 증식이 관\n\nJ Korean Obstet Gynecol Vol.27 No.1 February 2014\n109\n찰되었으며, 이부위에는 호중구, 대식세\n포, 림프구 및 형질세포의 침윤이 현저\n하였다. 대조군 8례 중 6례에서는 이식\n자궁조직이 복벽의 근층까지 침윤 증식\n되어 있었다(Fig. 6). \n처치군에서도 이식자궁조직은 대조군\n에서와 같이 자궁내막, 자궁중막 및 자\n궁외막의 구조를 모두 유지하고 있었으\n나 대조군에 비해서 자궁 점막상피세포, \n기질세포 및 자궁선의 발달은 미약하였\n다. 이식자궁조직과 복벽이 유착된 부위\n에서의 신생모세혈관 증식과 호중구, 대\n식세포, 림프구 및 형질세포의 침윤 등\n은 대조군에 비해서 미약하게 관찰되었\n다(Fig. 7).\n주요 병리조직학적 소견은 처치군은 \n대조군에 비해서 자궁선의 발달, 기질의 \n증식, 신생혈관의 증식 및 복벽근층내로\n의 성장 등의 소견이 완화되어 관찰되었\n다(Table 6).\n2) 자궁 및 난소\n음성군, 대조군 및 처치군의 모든 예\n에서 좌측 자궁은 정상범위의 소견을 나\n타내었으며, 난소도 모든 군에서 다양한 \n단계의 난포 및 황체가 발달되고 있는 \n정상범위의 소견만이 관찰되었다.\n  \nFig. 6. Histological Structure of Transplanted Uterine Tissue of Control Group. \n(6a) : Stromal hyperplasia and proliferation of connective tissue (arrow heads) into abdominal \nmuscle layer (m) are prominent. L : lumen of transplanted uterine tissue. * : desquamated \nepithelia and neutrophils. bar=100 μm\n(6b) : Higher magnification of Fig. 6a. Proliferation of connective tissue, infiltration of inflammatory \ncells including macrophages (arrow), and prominent angiogenesis (*) are shown. L : lumen of \ntransplanted uterine tissue. bar=20 μm\n  \nFig. 7. Histological Structure of Transplanted Uterine Tissue of Treated Group (Hominis \nPlacenta Pharmacopuncture therapy). \n(7a) : The stroma of transplanted uterine tissue is poorly developed. And proliferation of \nconnective tissue at the adherent region of abdominal wall (m) is observed weakly. L : lumen \nof transplanted uterine tissue. * : desquamated epithelia and neutrophils. bar=100 μm\n(7b) : Higher magnification of Fig. 7a. Proliferation of stromal connective tissue, infiltration of \ninflammatory cells (arrow heads) and angiogenesis (arrows) are not prominent. L : lumen of \ntransplanted uterine tissue. bar=20 μm\n\n紫河車 藥鍼이 실험적으로 유발된 흰쥐의 자궁내막증에 미치는 영향\n110\nGroup ID\nNumber\nActivities of\nUterine Gland\nProliferation of\nStromal Tissue\nAngiogenesis Ingrowing into\nAbdominal Muscle Wall\nControl\nC1 － ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋\nC2 － ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋\nC3 ＋＋ ＋ ＋ ＋\nC4 － ＋ ＋＋ －\nC5 ＋＋ ＋ ＋ －\nC6 ＋＋ ＋＋ ＋ ＋\nC7 ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋\nC8 ＋＋＋ ＋ ＋＋＋ ＋\nTreated\nT1 － ＋＋ ＋ ＋\nT2 － ＋＋ ＋＋ ＋＋＋\nT3 ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋\nT4 － ＋ ＋ －\nT5 － － ＋ ＋\nT6 － ＋＋ ＋ ＋\nT7 － ＋ ＋ ＋＋\nT8 ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ －\n＋: Mild, ＋＋: Moderate, ＋＋＋: Severe \nControl : right partial uterectomy and uterine autotransplantation and saline pharmacopuncture therapy\nTreated : right partial uterectomy and uterine autotransplantation and Hominis Placenta Pharmacopuncture therapy\nTable 6. Effects of Hominis Placenta Pharmacopuncture Therapy on the Histopathological \nLesions of Transplanted Uterine Tissues of Rats with Experimentally-induced Endometriosis\n8. COX-2 발현 양상 및 차이 \n대조군의 이식자궁조직에서 COX-2 양\n성반응은 점막상피세포, 낭내에 산재된 \n탈락상피세포 및 호중구의 세포질에서 \n강하게 나타났으며, 기질내 침윤된 호중\n구, 대식세포 및 형질세포의 세포질에서\n도 강하게 관찰되었다(Fig. 8).\n처치군에서의 COX-2 양성반응은 대\n조군에서 관찰된 곳과 동일한 부위에서 \n확인되었다(Fig. 9). \n대조군 및 처치군의 점막상피세포 및 \n간질에 침윤된 세포에서의 COX-2 양성\n반응 정도는 처치군이 대조군에 비해서 \n미약하게 관찰되었다(Table 7).\n  \nFig. 8. COX-2 Immunohistochemistry in Control Group.\n(8a) Strong positive reactions of COX-2 are expressed in cytoplasms of transplanted endometrial \nepithelia (arrows). L : lumen of transplanted uterine tissue. ABC immunohistochemistry, bar=20 μm.\n(8b) Strong positive reactions of COX-2 are expressed in cytoplasms of infiltrated inflammatory \ncells (arrows). ABC immunohistochemistry, bar=20 μm.\n\nJ Korean Obstet Gynecol Vol.27 No.1 February 2014\n111\n  \nFig. 9. COX-2 Immunohistochemistry in Hominis Placenta Pharmacopuncture Therapy \nGroup.\n(9a) Positive reactions of COX-2 are expressed in cytoplasms of transplanted endometrial \nepithelia (arrows). Compare the intensity of reaction with Fig. 8a. L : lumen of transplanted \nuterine tissue. ABC immunohistochemistry, bar=20 μm.\n(9b) Positive reactions of COX-2 are expressed in cytoplasms of infiltrated inflammatory cells \n(arrows). Compare the intensity of reaction with Fig. 8b. ABC immunohistochemistry, bar=20 μm.\nGroup ID\nNumber\nMucosal \nEpithelia\nCells in \nStroma\nControl\nC1 ＋＋ ＋＋＋\nC2 ＋＋ ＋＋\nC3 ＋＋＋ ＋＋\nC4 ＋ ＋\nC5 ＋ ＋＋\nC6 ＋＋ ＋＋\nC7 ＋＋＋ ＋＋\nC8 ＋＋＋ ＋＋＋\nTreated\nT1 ＋＋ ＋\nT2 ＋ ＋＋\nT3 ＋ ＋\nT4 ＋＋ ＋\nT5 ＋ ＋＋\nT6 ＋＋＋ ＋\nT7 ＋＋ ＋\nT8 ＋＋ ＋\n－: No, ＋: Mild, ＋＋: Moderate, ＋＋＋: \nStrong\nControl : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and saline Pharmacopuncture \ntherapy\nTreated : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and Hominis Placenta \nPharmacopuncture therapy\nTable 7. Effects of Hominis Placenta \nPharmacopuncture therapy on the Activities \nof COX-2 Expression in Transplanted \nUterine Tissues of Rats with Experimentally \n-induced Endometriosis\n9. VEGF 발현 양상 및 차이 \n대조군의 이식자궁조직에서 VEGF 양\n성반응은 간질에 침윤된 대식세포, 형질\n세포 등에서 강하게 나타났으며, 신생혈\n관에서도 강하게 관찰되었다(Fig. 10).\n처치군에서의 VEGF 양성반응은 대조\n군에서 관찰된 곳과 동일한 부위에서 확\n인되었다(Fig. 11)\n대조군 및 처치군의 신생혈관 및 간질\n에 침윤된 세포에서의 VEGF 양성반응 \n정도는 처치군이 대조군에 비해서 미약\n하게 관찰되었다(Table 8).\nFig. 10. VEGF Immunohistochemistry in \nControl Group. \nStrong positive reactions of VEGF are expressed \nin cytoplasms of infiltrated inflammatory cells \n(arrows) and endothelia of newly formed capillaries \n(arrow heads). ABC immunohistochemistry, \nbar=20 μm.\n\n紫河車 藥鍼이 실험적으로 유발된 흰쥐의 자궁내막증에 미치는 영향\n112\nFig. 11. VEGF immunohistochemistry in \nHominis Placenta Pharmacopuncture therapy \ngroup. \nPositive reactions of VEGF are expressed in \ncytoplasms of infiltrated inflammatory cells \n(arrows) and endothelia of newly formed \ncapillaries (arrow heads). Compare the intensity \nof reaction with Fig. 10. ABC immunohistochemistry, \nbar=20 μm.\nGroup ID\nNumber\nVascular \nEndothelia\nCells in \nStroma\nControl\nC1 ＋＋＋ ＋＋\nC2 ＋＋ ＋＋＋\nC3 ＋＋＋ ＋＋\nC4 ＋＋ ＋＋\nC5 ＋＋＋ ＋＋\nC6 ＋＋＋ ＋＋\nC7 ＋＋＋ ＋＋＋\nC8 ＋＋ ＋＋＋\nTreated\nT1 ＋ ＋\nT2 ＋ ＋＋\nT3 ＋ ＋＋\nT4 ＋＋ ＋\nT5 ＋＋ ＋＋\nT6 ＋ ＋＋\nT7 ＋＋＋ ＋\nT8 ＋＋＋ ＋＋＋\n－: No, ＋: Mild, ＋＋: Moderate, ＋＋＋: \nStrong\nControl : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and saline pharmacopuncture \ntherapy\nTreated : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and Hominis Placenta \nPharmacopuncture therapy\nTable 8. Effects of Hominis Placenta \nPharmacopuncture Therapy on the Activities \nof VEGF Expression in Transplanted \nUterine Tissues of Rats with Experimentally \n-induced Endometriotiosis\n10. 비만세포 수의 차이 \n대조군 및 처치군의 이식자궁조직에서 \n비만세포는 자궁내막의 기질 및 자궁외\n막의 결합조직에서 주로 관찰되었다(Fig. \n12, Fig. 13). \n이식자궁조직에 침윤된 비만세포 수는 \n처치군이 대조군에 비해서 적었으나 군간\n에 유의성 있는 차이는 없었다(Table 9).\nFig. 12. Mast cells in transplanted uterine \ntissue of control group. \nMast cells (arrows) are observed abundantly \nin adjacent tissue of transplanted uterine \ntissue. L; lumen of uterine tissue. arrows : \nendometrial epithelia. Toludine blue stain. \nbar=30 μm.\nFig. 13. Mast cells in transplanted uterine \ntissue of Hominis Placenta Pharmacopuncture \ntherapy group. \nA number of mast cells (arrow heads) are \nobserved in adjacent tissue of transplanted \nuterine tissue. Compare with Fig. 12. arrow; \nendometrial epithelia, Toludine blue stain. \nbar=30 μm.\n\nJ Korean Obstet Gynecol Vol.27 No.1 February 2014\n113\nGroup No. of Mast Cells \nControl (n=8) 89.40±28.5*\nTreated (n=8) 63.3 ±33.2\n* : data expressed as Mean±S.D.\nControl : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and saline pharmacopuncture \ntherapy \nTreated : right partial uterectomy and uterine \nautotransplantation and Hominis Placenta \nPharmacopuncture therapy\nTable 9. Effects of Hominis Placenta \nPharmacopuncture Therapy on the \nInfiltration of Mast Cells in Transplanted \nUterine Tissue of Rats with Experimentally \n-induced Endometriosis\nⅣ. 고  찰\n자궁내막증은 현재 정확한 기전이 알\n려져 있지 않지만, 월경 역류 현상에 의\n한 자궁내막 조직 및 월경혈의 골반강 \n내 유입으로 자궁내막조직이 자궁 내강 \n외에서 착상하여 성장하면서 여러 가지 \n병리 생태학적인 변화를 유발하는 부인\n과 영역에서의 만성질환이라는 설이 주\n된 의견이다\n27,28). 그 외에 림프계를 통한 \n전파, 체강상피 또는 뮐러관 잔유물의 \n화생, 수술 등으로 인한 외인성 전파 등\n이 원인으로 지목되고 있다29). \n월경혈의 역류현상은 대부분의 여성에\n게서 일어나는 흔한 현상이나, 실제로 \n자궁내막증이 발생되기 위해서는 복강 \n내에 퍼진 자궁 내막세포가 면역반응에 \n의해 제거･\n흡수되지 않아야 하고, 세포\n자연사(apoptosis)가 없어야 하며, 복막\n의 이소성 조직에 유착되고 신생혈관의 \n증식이 동반되어야한다\n30). 최근 이러한 \n과정에 필요한 유착물질, 단백분해효소, \n증식인자, 혈관형성인자 등의 발현 및 \n활성도를 비교･\n분석하는 연구들이 활발\n히 이루어지고 있다5).\n서양의학적 치료법으로는 수술요법과 \n약물치료가 있지만 높은 재발률과 많은 \n부작용 때문에 자궁내막증 치료에 한계\n가 있다\n29). 그러나 자궁내막증을 치료하\n지 않으면 표재성 자궁내막증의 심부 병\n변화, 자궁내막증 연관된 난소암의 발현, \n그리고, 요관, 직장, 방광 등의 주요 장기\n로의 자궁내막증 병변의 침윤 및 유착이 \n발생 하고, 결국에는 자궁내막증과 관련\n하여 만성 통증을 초래하여 여성의 삶의 \n질을 악화시키고, 불임증을 유발시키는 \n고질적인 부인과 질환이다\n28). \n자궁내막증과 일치되는 한의학적 병명\n은 없으나, 자궁내막증에서 나타나는 특\n징적인 증상들로 미루어보아 月經病, 痛\n經, 月經不調, 經行吐衄, 經行血咳, 崩漏, \n不姙의 범주에 속하는 것으로 인식되고, \n본 병증이 심한 경우에는 小結節이나 腫\n塊 등을 형성하기도 해서 癥瘕의 범주로 \n인식하기도 한다\n2,31,32). 병리적으로는 골\n반 내의 離經之血(瘀血)의 개념으로 인\n식하고, 寒凝血瘀, 氣滯血瘀, 氣虛血瘀, \n熱鬱血瘀 등으로 辨證施治한다2,31). 이에 \n따른 대표적 처방으로 少腹逐瘀湯, 血府\n逐瘀湯, 補陽還五湯, 小柴胡湯合桂枝湯 등\n이 제시되고 있다2). \n자궁내막증 치료에 대한 연구로는 瘀\n血에 중점을 두고, 주로 活血化瘀 위주\n의 處方10-13)이나 藥物16) 위주였으나, 최\n근 점차 면역학적 요인과 관련된 補益시\n키는 藥物과 處方에 관한 연구17,18)가 이\n루어지고 있다. 이처럼 대부분의 연구는 \n약물복용을 전제로 한 단일 약물이나 처\n방 위주로 연구되었으나, 다른 치료방법\n으로 보류관장법\n14,15), 山蔘藥鍼19), 蜂藥\n鍼20)에 관한 연구가 시도되고 있다. 그\n\n紫河車 藥鍼이 실험적으로 유발된 흰쥐의 자궁내막증에 미치는 영향\n114\n런데 보류관장법은 임상에서 활용하기에 \n곤란한 점이 많고, 山蔘藥鍼은 시술비용\n이 고가이면서 시술방법이 약침의 정맥\n주입법으로 한의사의 임상활용에 제한점\n이 있으며\n19), 蜂藥鍼은 시술시 통증이 많\n고, 알러지 체질일 경우 사용하기 곤란한 \n단점이 있다\n20). \n이에 저자들은 약물복용 위주의 기존 \n자궁내막증 치료에 대해 새로운 치료법\n으로 자하거 약침시술이 효과가 있을 것\n이라 판단하였다. 각종 부인과 질환에 \n많이 활용하는 紫河車(Hominis Placenta)\n는 性이 溫하고, 味는 甘鹹하며 肺, 肝, 腎 \n經으로 歸經하며 Estradiol, progesterone, \nacetyl glucosamine, D-galactose, mannose, \namino acid 등을 함유하며, 補氣, 養血, \n益精 등의 효능이 있어 臨床에서는 强壯\n藥으로 人體의 저항력을 강화하는데 활\n용하며\n21), 최근 연구에 의하면 紫河車 \n藥鍼이 월경통25), 기관지천식27), 항산화\n효과23), 골다공증24), 등의 효과 있는 것\n으로 밝혀지고 있다. 그런데 紫河車에는 \nEstrogen성분이 포함되어 있어 자궁내막\n증을 악화시킬 수도 있기에34), 이론적으\n로 임상에서 자궁내막증 환자에게 금기\n가 될 수도 있다. 그래서 紫河車 藥鍼이 \n자궁내막증에 미치는 영향을 연구하는 \n것은 임상에서 중요하다고 판단하여 본 \n연구를 실시하였다. \n저자들은 紫河車 藥鍼의 자궁내막증 \n치료효과를 확인하기 위해, 자궁의 자가\n이식법으로 자궁내막증을 유발한 흰쥐를 \n음성군, 대조군, 처치군으로 나누어 실험\n을 실시하였다. 실험 후 각 군의 체중, \n이식자궁의 육안소견 및 체적, 자궁과 \n난소의 중량을 측정하고, 복강 세척액내 \ncytokine의 함량을 비교 측정하였으며, 병\n리조직학적 검사, 면역조직화학적 검사 \n및 비만세포조직학 검사를 실시하였다.\n실험결과 흰쥐의 체중, 좌측 자궁 및 \n양측 난소의 중량은 모든 군간에 유의성 \n있는 차이가 없었고, 모든 군의 좌측 자\n궁과 양측 난소의 병리조직학적 소견도 \n정상범위의 소견을 나타내었다. 그러나 \n이식 자궁조직의 체적의 차이에서 처치\n군의 이식 자궁 조직은 대조군에 비해서 \n유의성 있게 작았다. 이러한 결과는 본 \n실험이 자궁내막증 유발이 성공적으로 \n수행되었으며, 紫河車 藥鍼이 정상 자궁\n조직과 양측 난소에는 영향을 주지 않으\n면서, 이식 자궁내막조직의 성장을 억제\n하는 효과가 있음을 알 수 있다.\nCytokine은 용해성 세포 중재자(soluble \ncellular mediator)로서, 면역과 염증 반\n응의 개시, 전파, 조절에 있어서 다양한 \n생물학적 기능을 수행하는 등 주요한 역할\n을 하는 물질로, IL-1, IL-6, IL-8 TNF-\nα, \nMCP-1, IFN-γ 등이 자궁내막증과 연관\n된다고 알려져 있다35,46).\nTNF-α는 활성화된 대식세포에서 주\n로 생성되는 cytokine으로 강력한 염증\n성, 세포독성 및 혈관 형성 능력을 지니\n고 있다\n37). TNF-α는 자궁내막증 여성의 \n복강 내에서 증가되어 있고, 자궁내막증\n의 정도와 이소성 자궁내막 조직의 유착 \n및 혈관형성에 일정한 역할을 하고 있으\n며, 불임과도 연관되어 있어 자궁내막증\n의 병태 생리에 중요한 역할을 하는 것\n으로 알려져 있다\n37-39).\n실험 종료일에 측정한 복강 세척액내 \nTNF-α의 함량은 대조군이 음성군에 비\n해서 유의성 있게 높았고, 처치군은 대\n조군에 비해서 현저히 낮았으나 유의성\n이 있는 차이성이 관찰되지 않았다. 이\n\nJ Korean Obstet Gynecol Vol.27 No.1 February 2014\n115\n는 자궁내막증의 발생에 TNF-α가 관여\n하였음을 나타내고, 紫河車 藥鍼이 TNF-α\n의 생성 감소를 통한 이식된 자궁내막 조\n직의 발달을 억제하는데 충분하지는 못하\n지만 어느 정도 효과가 있음을 의미한다.\nMCP-1은 대식세포와 섬유아세포의 \n주된 주화성 인자로 단핵세포와 대식세\n포의 활성화를 유도하며, 자궁내막증 환\n자의 복수에서 증가된 IL-1 ß와 TNF-α\n는 자궁내막세포와 이소성 자궁내막세포\n에서 MCP-1의 분비를 자극하여 복막강\n액에서 증가되며, 이는 자궁내막증의 정\n도와 이소성 자궁내막조직의 복강내 유\n착과도 연관되어 있다\n40,41).\n실험 종료일에 측정한 복강 세척액내 \nMCP-1의 함량은 대조군이 음성군에 비\n해 유의성 있게 높았고, 처치군은 대조\n군에 비해서 유의성 있게 낮았다. 이로써 \nMCP-1이 자궁내막증의 발달에 관여하\n고 있음을 알 수 있으며, 紫河車 藥鍼이 \nMCP-1의 분비를 감소시켜서 이식된 자\n궁내막조직의 성장을 억제한다는 것을 \n알 수 있다.\n본 연구에서 처치군의 이식자궁조직이 \n대조군에 비해서 자궁선의 발달, 기질의 \n증식, 신생혈관의 증식 및 복벽근층내로\n의 성장 등의 소견이 완화되어 관찰되었\n기에 紫河車 藥鍼이 이식자궁내막조직의 \n발달을 억제하는 효과가 있음을 병리조\n직학적으로도 확인할 수 있었다.\nCOX-2는 IL-1과 VEGF의 영향을 받\n아 발현하게 되며, arachidonic acid로부\n터 prostaglandin을 합성하는 중요한 효\n소로 주로 염증 반응에 관여 한다\n42,43). \n자궁내막증의 진행 및 성장에는 혈관형\n성이 필수적인 것으로 알려져 있는데, \nCOX-2의 과발현은 자궁내막증 환자의 \n자궁내막 조직과 복막의 대식세포에서 \n관찰되어지며, 이는 세포자연사(apoptosis)\n와 면역반응의 억제, 신생혈관 형성과 연\n관되어 있어서 자궁내막증의 병태생리에 \n중요한 역할을 한다\n42,43).\n실험 종료일에 관찰된 대조군의 이식\n자궁조직에서 COX-2 양성반응은 대부\n분의 층에서 강하게 나타났고, 처치군의 \n경우 대조군과 동일한 부위에서 확인 되\n었으나, 대조군에 비해서 미약하게 관찰\n되었다. 따라서 자궁내막증의 발생에 COX-2\n가 관여하며, 紫河車 藥鍼이 COX-2의 발\n현을 억제시켜 이식된 자궁내막조직의 발\n달을 억제한다는 것을 알 수 있다.\nVEGF는 분자량 25-45 kD의 헤파린 \n결합성 당단백질로서 강력한 혈관내피세\n포 특이적 세포분열 촉진인자이며 혈관 \n투과성 조절인자로 알려져 있고, 혈관내\n피세포의 prime regulator 로서 강력한 \n혈관형성인자 중의 하나이다\n44,45). 현재까\n지 밝혀진 혈관형성인자로는 섬유모세포 \n성장인자(fibroblast growth factor), 혈소\n판 기원 내피세포성장인자(platelet-derived \nendothelial cell growth factor), 변형성장\n인자(transforming growth factor), 혈관내\n피세포성장인자(vascular endothelial cell \ngrowth factor) 등이 있다\n46). 자궁내막증의 \n발생 기전에는 자궁내막조직의 역류 후 골\n반 내 착상하게 하는 과정에서 비정상적 \n혈관형성이 중요한 역할을 하는 것으로 \n생각 된다\n47). 따라서 자궁내막증의 발생\n에 있어 혈관형성에 관여하는 인자들에 \n대해 주목하게 되었고, 그 중 신생 혈관의 \n형성에 중요한 역할을 하는 것으로 알려\n진 VEGF와 자궁내막증의 관계에 대한 \n연구가 활발히 진행 중이다\n48).\n실험 종료일에 관찰된 대조군의 이식\n\n紫河車 藥鍼이 실험적으로 유발된 흰쥐의 자궁내막증에 미치는 영향\n116\n자궁 조직에서 VEGF 양성반응은 간질\n에 침윤된 대식세포, 형질세포 등에서 \n강하게 나타났으며, 신생혈관에서도 강\n하게 관찰되었다. 처치군은 VEGF가 관\n찰된 곳은 대조군과 같지만 양성반응 정\n도가 대조군에 비해 미약했다. 따라서 \nVEGF는 자궁내막증의 발현에 관여하\n며, 紫河車 藥鍼은 VEGF의 발현을 억제\n하여 신생혈관 형성을 제약하고, 그로인\n해 자궁내막조직의 성장을 억제한 것으\n로 볼 수 있다.\n비만세포는 골수내 CD34 progenitor \ncell로부터 발생하여 외부 자극에 의해 \n활성화되면 탈과립화되어 히스타민과 같\n은 알레르기 염증반응을 일으키는 매개\n체를 생산 및 분비하게 되는데, 그 외에 \nIL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, \nIL-16, TNF-\nα, VEGF, granulocyte-macrophage \ncolony stimulating factor(GM-CSF), stem \ncell factor(SCF), basic fibroblast growth \nfactor(bFGF), monocyte inhibitory protein-1α \n(MIP-1α) 등의 cytokine도 생산 및 분\n비하여 염증성 반응을 유발하고, 만성질\n환의 진행을 초래 한다49,40). \n실험 종료일에 관찰된 대조군 및 처치\n군의 이식자궁조직에서 비만세포는 자궁\n내막의 기질 및 자궁외막의 결합조직에\n서 주로 관찰되었고, 이식자궁조직에 침\n윤된 비만세포 수는 처치군이 대조군에 \n비해서 낮았으나, 군간에 유의성 있는 \n차이는 없었다. 하지만 처치군 비만세포\n의 수가 대조군에 비해 낮은 것으로 보\n아 紫河車 藥鍼이 비만 세포의 발현을 \n어느 정도 억제한 것으로 보인다.\n이상의 실험 결과를 종합해보면 紫河\n車 藥鍼은 정상 자궁과 난소에는 영향을 \n주지 않으면서, 이식된 자궁내막 조직의 \n발달을 억제하는 효과가 있으며, 이러한 \n효과는 MCP-1의 생성억제, COX-2 및 \nVEGF의 발현 억제 등의 결과와 밀접한 \n관련이 있는 것으로 생각된다. \n본 연구를 통하여 紫河車 藥鍼이 자궁\n내막증 치료에 효과가 있음을 실험적 방\n법으로 밝혔으며, 임상적으로 활용할 수 \n있는 근거를 제시하였다. 따라서 향후 \n임상실험을 통하여 紫河車 藥鍼이 난치\n성 질환인 자궁내막증 치료에 효과가 있\n음을 객관적으로 밝혀지길 기대한다.\nⅤ. 결  론\n紫河車 藥鍼이 자궁내막증의 발생에 \n미치는 영향을 확인하기 위해서 자궁 자\n가이식법으로 유발된 자궁내막증 흰쥐를 \n음성군, 대조군 및 紫河車 藥鍼을 처치\n한 처치군으로 분류하였다. 30일간 紫河\n車 藥鍼을 2일 간격으로 복부피하에 주\n사하고, 체중, 난소 및 자궁 무게, 이식자\n궁조직의 체적을 측정하였다. ELISA 법\n을 이용하여 복막강세척액내 TNF-\nα 및 \nMCP-1 함량을 측정하였다. 또한 이식자\n궁조직에 대한 병리조직학적 검사와 COX-2 \n및 VEGF 면역조직화학, 그리고 비만세\n포 조직화학을 실시하여 아래와 같은 결\n과를 얻었다.\n1. 이식 자궁조직의 체적(mm\n3)은 처치군 \n(55.4±41.6)이 대조군(140.2±66.1)에 비\n해서 유의성 있게 낮았다(p<0.01).\n2. 복막강세척액내 MCP-1 함량(pg/ml)\n은 처치군(1446.2±280.3)이 대조군(1117.6 \n±60.5)에 비해서 유의성 있게 감소하\n였다(p<0.01).\n\nJ Korean Obstet Gynecol Vol.27 No.1 February 2014\n117\n3. 병리조직학적으로 처치군은 자궁선의 \n발달, 기질의 증식 및 모세혈관의 신\n생이 대조군에 비해서 미약하게 관찰\n되었다.\n4. 면역조직화학적으로 처치군에서의 COX-2 \n및 VEGF 발현은 대조군에 비해서 미\n약하게 관찰되었다.\n이상의 결과를 종합하면, 紫河車 藥鍼\n은 실험적으로 유발된 이식자궁조직의 발\n달을 억제하는 효과가 있는 것으로 사료\n된다.\n□ 투  고  일 : 2014년  1월 27일\n□ 심  사  일 : 2014년  2월  4일\n□ 게재확정일 : 2014년  2월 10일\n참고문헌\n1. 대한산부인과학회. 부인과학. 제4판. 서\n울:고려의학. 2007:399-424.\n2. 한방여성의학 편찬위원회. 한방여성의\n학Ι. 서울:도서출판 정담. 2007:191, 205-6.\n3. Martin DC, Ling FW. Endometriosis and \npain. Clinical obstetrics and gynecology. \n1999;42(3):664-86.\n4. Kim AH, Adamson GD. Surgical treatment \noptions for endometriosis. 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